5×พรีมิกซ์ Neoscript Fast RT-qPCR บวก-UNG
หมายเลขแมว: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) เป็นส่วนผสมที่ใช้โพรบแบบหลอดเดียวที่มีความเสถียรสูง เหมาะสำหรับการถอดรหัสแบบย้อนกลับในขั้นตอนเดียวและ PCR เชิงปริมาณ (qRT-PCR)รองรับการผสมไพรเมอร์และโพรบล่วงหน้า และคงความเสถียรหลังจากเก็บรักษาเป็นเวลานานที่อุณหภูมิต่ำสามารถเพิ่มตัวอย่างที่จะทดสอบได้โดยตรงเมื่อใช้งาน โดยไม่ต้องเปิดท่อ/ทำการปิเปตเพิ่มเติมผลิตภัณฑ์นี้ประกอบด้วยส่วนประกอบต่างๆ เช่น DNA polymerase ที่เริ่มร้อน, M-MLV, uracil DNA glycosylase ที่ไม่ทนต่อความร้อน (TS-UNG), สารยับยั้ง RNase, MgCl2, dNTP (ที่มี dUTP แทน dTTP) และความคงตัวด้วย DNA polymerase ของการขยายอย่างรวดเร็วที่ได้รับการดัดแปลงพันธุกรรมและ DNA polymerase จึงสามารถขยาย PCR ให้เสร็จสมบูรณ์ได้ภายใน 20-40 นาทีรีเอเจนต์นี้ใช้บัฟเฟอร์พิเศษสำหรับ qPCR ที่มีเอนไซม์ผสมของเอนไซม์ขยายขนาดที่ต้านการยับยั้งและเอนไซม์ UNGดังนั้นจึงสามารถรับการขยายยีนเป้าหมายได้ดี และป้องกันการขยายผิดพลาดที่เกิดจาก PCR ที่ตกค้างและมลภาวะจากละอองลอยรีเอเจนต์นี้เข้ากันได้กับเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงส่วนใหญ่จากผู้ผลิต เช่น Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad และ Roche
ส่วนประกอบ
1.25×มิกซ์ Neoscript Fast RTase/UNG
2.5×บัฟเฟอร์พรีมิกซ์ Neoscript Fast RT (dUTP)
สภาพการเก็บรักษา
ส่วนประกอบทั้งหมดควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C เพื่อการเก็บรักษาระยะยาว และ 4°C ได้นานถึง 3 เดือนกรุณาผสมให้ละเอียดหลังจากการละลายและปั่นแยกก่อนใช้หลีกเลี่ยงการแช่แข็ง-ละลายบ่อยๆ
การเตรียมระบบปฏิกิริยา qRT-PCR
| ส่วนประกอบ | 25ไมโครลิตรระบบ | 50ไมโครลิตรระบบ | ความเข้มข้นสุดท้าย |
| 5×บัฟเฟอร์พรีมิกซ์ Neoscript Fast RT (dUTP) | 5ไมโครลิตร | 10ไมโครลิตร | 1× |
| 25×มิกซ์ Neoscript Fast RTase/UNG | 1ไมโครลิตร | 2ไมโครลิตร | 1× |
| 25×ไพรเมอร์-โพรบผสมa | 1ไมโครลิตร | 2ไมโครลิตร | 1× |
| เทมเพลต RNAb | - | - | - |
| ddH2O | สูงถึง 25μL | สูงถึง 50μL | - |
1) a. ความเข้มข้นสุดท้ายของไพรเมอร์มักจะอยู่ที่0.2μMเพื่อผลลัพธ์ที่ดีกว่า สามารถปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ให้เหมาะสมได้ภายในช่วง 0.2-1μMโดยทั่วไป ความเข้มข้นของโพรบสามารถปรับให้เหมาะสมภายในช่วง 0.1-0.3μM
2) ข.เมื่อใช้ขั้นตอน PCR ที่รวดเร็ว การเพิ่มความเข้มข้นของไพรเมอร์และโพรบอาจส่งผลให้ได้ผลลัพธ์การขยายที่ดีขึ้น และควรปรับอัตราส่วนให้เหมาะสมตามนั้น
3) ตัวอย่างประเภทต่างๆ มีประเภทและเนื้อหาของสารยับยั้งและจำนวนสำเนาของยีนเป้าหมายที่แตกต่างกันควรพิจารณาปริมาตรตัวอย่างตามสภาพจริงเจือจางตัวอย่างด้วยน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอสหรือบัฟเฟอร์ TE หากจำเป็น
ปฏิกิริยาซีเงื่อนไข
| ขั้นตอน PCR ปกติ | ขั้นตอน PCR ที่รวดเร็ว | ||||||
| ขั้นตอน | อุณหภูมิ | เวลา | วงจร | ขั้นตอน | อุณหภูมิ | เวลา | วงจร |
| การถอดความแบบย้อนกลับ | 50 ℃ | 10-20 นาที | 1 | การถอดความแบบย้อนกลับ | 50 ℃ | 5 นาที | 1 |
| โพลีเมอเรส การเปิดใช้งาน | 95 ℃ | 1-5 นาที | 1 | โพลีเมอเรส การเปิดใช้งาน | 95 ℃ | 30s | 1 |
| การเสียสภาพ | 95 ℃ | 10-20ส | 40-50 | การเสียสภาพ | 95 ℃ | 1-3 วินาที | 40-50 |
| การหลอม และ ส่วนขยาย | 56-64 ℃ | 20-60ส | การหลอม และ ส่วนขยาย | 56-64 ℃ | 3-20วิ | ||
ควบคุมคุณภาพ
1-การตรวจจับฟังก์ชัน: ความไว ความจำเพาะ และการทำซ้ำของ qPCR
2.ไม่มีกิจกรรมของนิวคลีเอสจากภายนอก: ไม่มีมลพิษจากเอนโดนิวคลีเอสและเอ็กโซนิวคลีเอสจากภายนอก
หมายเหตุ
1.อัตราการขยายของ DNA polymerase อย่างรวดเร็วคือไม่น้อยกว่า 1kb/10sเครื่องมือ PCR ต่างๆ มีความเร็วในการทำความร้อนและความเย็น โหมดควบคุมอุณหภูมิ และการนำความร้อนที่แตกต่างกัน ดังนั้นการปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์/โพรบให้เหมาะสมและวิธีการทำงานร่วมกับเครื่องมือ PCR แบบรวดเร็วเฉพาะของคุณจึงเป็นสิ่งสำคัญ
2.ผลิตภัณฑ์นี้สามารถใช้งานได้อย่างกว้างขวาง และเหมาะสำหรับการวินิจฉัยระดับโมเลกุลที่มีความไวสูงขอแนะนำให้ใช้วิธี PCR สามขั้นตอนสำหรับไพรเมอร์ที่มีอุณหภูมิการหลอมต่ำ หรือสำหรับการขยายชิ้นส่วนขนาดยาวมากกว่า 200 bp
3.เนื่องจากแอมพลิคอนที่ต่างกันมีประสิทธิภาพการใช้งาน dUTP ที่แตกต่างกันและมีความไวต่อ UNG ต่างกัน ดังนั้นรีเอเจนต์จึงควรได้รับการปรับให้เหมาะสมหากความไวในการตรวจจับลดลงเมื่อใช้ระบบ UNGโปรดติดต่อเราเพื่อขอรับการสนับสนุนทางเทคนิคหากจำเป็น
4.เพื่อหลีกเลี่ยงการขยายผลิตภัณฑ์ PCR แบบพกพา จึงจำเป็นต้องมีพื้นที่ทดลองและปิเปตโดยเฉพาะสำหรับการขยายสัญญาณใช้งานโดยสวมถุงมือและเปลี่ยนบ่อยๆ และอย่าเปิดท่อ PCR หลังการขยายสัญญาณ
