ดีเนส ไอ

DNase I (Deoxyribonuclease I) เป็น endodeoxyribonuclease ที่สามารถย่อย DNA แบบเดี่ยวหรือแบบคู่ได้โดยจดจำและแยกพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ออกเพื่อสร้างโมโนดีออกซีนิวคลีโอไทด์หรือโอลิโกดีออกซีนิวคลีโอไทด์แบบเกลียวเดี่ยวหรือคู่ที่มีหมู่ฟอสเฟตที่ปลาย 5′ และไฮดรอกซิลที่ปลาย 3′กิจกรรมของ DNase I ขึ้นอยู่กับ Ca2+ และสามารถกระตุ้นได้ด้วยไอออนโลหะไดวาเลนต์ เช่น Mn2+ และ Zn2+5mM Ca2+ ปกป้องเอนไซม์จากการไฮโดรไลซิสเมื่อมี Mg2+ เอนไซม์สามารถสุ่มจดจำและแยกตำแหน่งใดๆ บนสายดีเอ็นเอใดก็ได้เมื่อมี Mn2+ DNA สายคู่สามารถรับรู้และแยกออกพร้อมกันที่ตำแหน่งเดียวกันเกือบทั้งหมด เพื่อสร้างชิ้นส่วน DNA ปลายแบนหรือชิ้นส่วน DNA ปลายเหนียวที่มีนิวคลีโอไทด์ 1-2 ตัวยื่นออกมา

คุณสมบัติของผลิตภัณฑ์

DNase I ของตับอ่อนของวัวถูกแสดงออกในระบบการแสดงออกของยีสต์และทำให้บริสุทธิ์

Cส่วนประกอบ

การขนส่งและการเก็บรักษา

1. ความเสถียรในการจัดเก็บ: – 15 ℃ ~ -25 ℃ สำหรับการจัดเก็บ

2. เสถียรภาพในการขนส่ง: การขนส่งภายใต้แพ็คน้ำแข็ง

3. บรรจุใน: Tris-HCl 10 มิลลิโมลาร์, CaCl 2 มิลลิโมลาร์₂กลีเซอรอล 50%, pH 7.6 ที่ 25 ℃

คำจำกัดความของหน่วย

หนึ่งหน่วยหมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่จะสลาย DNA pBR322 จำนวน 1 ไมโครกรัมอย่างสมบูรณ์ใน 10 นาทีที่อุณหภูมิ 37°C

ควบคุมคุณภาพ

อาร์เนส:5U ของ DNase I ที่มี 1.6 μg MS2 RNA เป็นเวลา 4 ชั่วโมงที่ 37 ℃ ทำให้ไม่มีการย่อยสลายตามที่กำหนดโดย agarose gel electrophoresis

แบคทีเรีย เอนโดท็อกซิน:การทดสอบ LAL ตาม Chinese Pharmacopoeia IV 2020 ฉบับวิธีทดสอบขีดจำกัดของเจล กฎทั่วไป (1143)ปริมาณเอนโดทอกซินของแบคทีเรียควรอยู่ที่ ≤10 EU/มก.

คำแนะนำสำหรับการใช้งาน

1.เตรียมสารละลายปฏิกิริยาในหลอดปลอด RNase ตามสัดส่วนที่แสดงด้านล่าง:

2.37 ℃ เป็นเวลา 15 นาที;

3.เพิ่มบัฟเฟอร์ปลายสายเพื่อหยุดปฏิกิริยา และให้ความร้อนที่ 65°C เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อปิดใช้งาน DNase I ตัวอย่างสามารถนำมาใช้โดยตรงสำหรับการทดลองถอดรหัสครั้งถัดไป

หมายเหตุ

1. ใช้ 1U DNase I ต่อ RNA ไมโครกรัม หรือใช้ 1U DNase I สำหรับ RNA น้อยกว่า 1 ไมโครกรัม

2.ควรเติม EDTA ลงในความเข้มข้นสุดท้ายที่ 5 mM เพื่อป้องกัน RNA จากการถูกย่อยสลายในระหว่างการหยุดการทำงานของเอนไซม์