โปร
สินค้า
รูปภาพเด่น RNA แบบเกลียวคู่ (dsRNA) ELISA KIT HCP0033A
  • RNA แบบเกลียวคู่ (dsRNA) ELISA KIT HCP0033A

ชุด ELISA RNA แบบเกลียวคู่ (dsRNA)


หมายเลขแมว: HCP0033A

บรรจุภัณฑ์:48T/96T

ชุดนี้คือ Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ควบคู่กับระบบไบโอติน-สเตรปตาวิดิน

รายละเอียดสินค้า

ข้อมูลผลิตภัณฑ์

ชุดนี้คือชุดทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์ (ELISA) ร่วมกับระบบไบโอติน-สเตรปตะวิดิน สำหรับการตรวจวัดเชิงปริมาณของ dsRNA ที่มีความยาวมากกว่า 60 คู่เบส (bp) โดยไม่คำนึงถึงลำดับจานถูกเคลือบไว้ล่วงหน้าด้วยแอนติบอดีต่อต้าน dsRNAเพิ่ม dsRNA ที่มีอยู่ในตัวอย่างและจับกับแอนติบอดีที่เคลือบอยู่บนหลุมจากนั้นจึงเติมแอนติบอดีต่อต้าน dsRNA แบบไบโอทินิเลตและจับกับ dsRNA ในตัวอย่างหลังจากการล้าง HRP-Streptavidin จะถูกเติมและจับกับแอนติบอดีต่อต้าน dsRNA ของ Biotinylatedหลังจากการฟักตัว HRP-Streptavidin ที่ไม่ถูกผูกไว้จะถูกชะล้างออกไปจากนั้นสารละลายซับสเตรต TMB จะถูกเติมและเร่งปฏิกิริยาโดย HRP เพื่อให้ได้ผลิตภัณฑ์สีน้ำเงินที่เปลี่ยนเป็นสีเหลืองหลังจากเติมสารละลายหยุดกรดความหนาแน่นของสีเหลืองเป็นสัดส่วนกับปริมาณเป้าหมายของ dsRNA ที่ถูกจับในจานการดูดกลืนแสงวัดที่ 450 นาโนเมตร


  • ก่อนหน้า:
  • ต่อไป:

  • แอปพลิเคชัน

    ชุดนี้ใช้สำหรับการวัดเชิงปริมาณของ dsRNA ที่ตกค้าง

      

    ส่วนประกอบชุดอุปกรณ์

     

    ส่วนประกอบ

    HCP0033A-1

    HCP0033A-2

    1

    เอลิซา ไมโครเพลท

    8×6

    8×12

    2

    แอนติบอดีตรวจจับไบโอติน (100x)

    60ไมโครลิตร

    120ไมโครลิตร

    3

    Hrp-สเตรปตะวิดิน (100x)

    60ไมโครลิตร

    120ไมโครลิตร

    4

    บัฟเฟอร์เจือจาง

    15มล

    30มล

    5

    ทีเอ็มบี ซับสเตรท โซลูชั่น

    6มล

    12มล

    6

    หยุดการแก้ปัญหา

    3มล

    6มล

    7

    บัฟเฟอร์ล้างเข้มข้น (20x)

    20มล

    40มล

    8

    มาตรฐาน (UTP, 5ng/μL)

    7.5ไมโครลิตร

    15ไมโครลิตร

    9

    มาตรฐาน (pUTP,5ng/μL)

    7.5ไมโครลิตร

    15ไมโครลิตร

    10

    มาตรฐาน (N1-Me-pUTP, 5ng/μL)

    7.5ไมโครลิตร

    15ไมโครลิตร

    11

    มาตรฐาน (5-OMe-UTP, 5ng/μL)

    7.5ไมโครลิตร

    15ไมโครลิตร

    12

    บัฟเฟอร์ STE

    25มล

    50มล

    13

    เครื่องซีลเพลท

    2 ชิ้น

    4 ชิ้น

    14

    คู่มือการใช้งานและ COA

    1 สำเนา

    1 สำเนา

     

    การจัดเก็บและความเสถียร

    1. สำหรับชุดอุปกรณ์ที่ไม่ได้ใช้: ชุดทั้งหมดสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2~8°C ในช่วงอายุการเก็บรักษาควรหลีกเลี่ยงแสงจ้าเพื่อความเสถียรในการจัดเก็บ

     

     

    2. สำหรับชุดอุปกรณ์ที่ใช้แล้ว: เมื่อเปิดไมโครเพลทแล้ว โปรดปิดหลุมที่ไม่ได้ใช้ด้วยเครื่องซีลเพลท และนำกลับไปยังซองฟอยล์ที่มีซองดูดความชื้น ปิดผนึกด้วยซิปในซองฟอยล์ และกลับไปที่ 2~8°C โดยเร็วที่สุดหลังการใช้งานรีเอเจนต์อื่นๆ ควรส่งคืนที่อุณหภูมิ 2~8°C โดยเร็วที่สุดหลังการใช้งาน

     

    วัสดุที่จำเป็นแต่ไม่ได้ให้มา

    1. เครื่องอ่านไมโครเพลทพร้อมตัวกรอง 450 ± 10 นาโนเมตร (ดีกว่าหากสามารถตรวจจับได้ที่ความยาวคลื่น 450 และ 650 นาโนเมตร)

    2. เครื่องปั่นไมโครเพลท

    3. ทิปและหลอดหมุนเหวี่ยงที่ปราศจาก RNase

     

    ผังการดำเนินงาน

     -

     

     

    ก่อนที่คุณจะเริ่มต้น

    1. นำส่วนประกอบของชุดอุปกรณ์และตัวอย่างทั้งหมดไปไว้ที่อุณหภูมิห้อง (18-25°C) ก่อนใช้งานหากชุดอุปกรณ์จะไม่ถูกใช้หมดในคราวเดียว โปรดนำแถบและรีเอเจนต์ออกสำหรับการทดลองปัจจุบันเท่านั้น และปล่อยให้แถบและรีเอเจนต์ที่เหลืออยู่ในสภาพที่ต้องการ

    2. บัฟเฟอร์สำหรับล้าง: เจือจางบัฟเฟอร์ล้างแบบเข้มข้น 20× 40 มล. กับน้ำปราศจากไอออนหรือน้ำกลั่น 760 มล. เพื่อเตรียมบัฟเฟอร์สำหรับล้าง 1× ขนาด 800 มล.

    3. มาตรฐาน: ปั่นหรือปั่นแยกสารละลายสต๊อกสั้นๆ ก่อนใช้งานความเข้มข้นของสี่มาตรฐานที่ให้ไว้คือ 5ng/μLสำหรับมาตรฐาน UTP และ pUTP dsRNA โปรดเจือจางสารละลายสต็อกเป็น 1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312,0.0156,0pg/μL ด้วยบัฟเฟอร์ STE เพื่อวาดเส้นโค้งมาตรฐานสำหรับมาตรฐาน N1-Me-pUTP dsRNA โปรดเจือจางสารละลายสต็อกเป็น 2,1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312, 0pg/μL ด้วยบัฟเฟอร์ STE เพื่อวาดเส้นโค้งมาตรฐานสำหรับมาตรฐาน 5-OMe-UTP dsRNA โปรดเจือจางสารละลายสต็อกเป็น 4,2,1,0.5, 0.25,0.125,0.0625, 0pg/μL ด้วยบัฟเฟอร์ STE เพื่อวาดเส้นโค้งมาตรฐานเราขอแนะนำว่ามาตรฐานสามารถเจือจางได้ดังต่อไปนี้:

     

    มาตรฐาน N1-Me-pUTP dsRNA

     

    เลขที่

     

    คอนสุดท้าย

    (pg/ไมโครลิตร)

    คำแนะนำการเจือจาง

    ส.ศ

    กันชน

     

    มาตรฐาน

     

     

    A

     

    B

    C

    D

    E

    F

    G

    H

    100

     

    2

     

    1

    0.5

    0.25

    0.125

    0.0625

    0.0312

    0

    49ไมโครลิตร

     

    490ไมโครลิตร

     

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    มาตรฐาน 1μL 5ng/μL

    10ไมโครลิตร 100pg/ไมโครลิตร

    สารละลาย

    สารละลาย 250ไมโครลิตร A

    สารละลาย 250ไมโครลิตร B

    สารละลาย 250ไมโครลิตร C

    สารละลาย 250ไมโครลิตร D

    สารละลาย 250μL E

    สารละลาย 250ไมโครลิตร F

    /

    สำหรับมาตรฐาน 5-OMe-UTP dsRNA

     

    เลขที่

     

    คอนสุดท้าย

    (pg/ไมโครลิตร)

    คำแนะนำการเจือจาง

    ส.ศ

    กันชน

     

    มาตรฐาน

     

     

     

    A

     

    B

    C

    D

    E

    F

    G

    H

     

    100

     

    4

     

    2

    1

    0.5

    0.25

    0.125

    0.0625

    0

     

    49ไมโครลิตร

     

    480ไมโครลิตร

     

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    250ไมโครลิตร

    1ไมโครลิตร 5ng/ไมโครลิตร

    มาตรฐาน

    20ไมโครลิตร 100pg/ไมโครลิตร

    สารละลาย

    สารละลาย 250ไมโครลิตร A

    สารละลาย 250ไมโครลิตร B

    สารละลาย 250ไมโครลิตร C

    สารละลาย 250ไมโครลิตร D

    สารละลาย 250μL E

    สารละลาย 250ไมโครลิตร F

    /

    4. แอนติบอดีการตรวจจับที่มีไบโอตินและสารละลายการทำงานของ HRP-สเตรปตะวิดิน: ปั่นหรือปั่นแยกสารละลายสต๊อกสั้นๆ ก่อนใช้งานเจือจางความเข้มข้นในการทำงานด้วยบัฟเฟอร์การเจือจาง

    5. สถานะย่อย TMB: ดูดสารละลายในปริมาณที่ต้องการด้วยปลายที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว และอย่าเทสารละลายที่เหลือลงในขวดอีกครั้งสารตั้งต้น TMB มีความไวต่อแสง อย่าให้สารตั้งต้น TMB ถูกแสงเป็นเวลานาน

     

    การใช้โปรโตคอล

    1. กำหนดจำนวนแถบที่จำเป็นสำหรับการทดสอบใส่แถบเข้าไปในเฟรมเพื่อใช้งานแถบเพลตที่เหลือที่ไม่ได้ใช้ในการทดสอบนี้ควรบรรจุใหม่ในถุงที่มีสารดูดความชื้นปิดถุงให้สนิทเพื่อเก็บในตู้เย็น

    2. เติมสารมาตรฐาน ตัวอย่างเปล่า และตัวอย่างเจือจางครั้งละ 100μL ลงในหลุมที่เหมาะสมปิดด้วยเครื่องซีลเพลทฟักไข่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง โดยเขย่าที่ 500 รอบต่อนาทีตัวอย่างควรเจือจางด้วยบัฟเฟอร์ STE เพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่เหมาะสมเพื่อการตรวจวิเคราะห์ที่แม่นยำ

    3. ขั้นตอนการล้าง: ดูดสารละลายแล้วล้างด้วยบัฟเฟอร์ล้าง 250μL ในแต่ละหลุม และปล่อยทิ้งไว้ 30 วินาทีทิ้งบัฟเฟอร์ล้างให้หมดโดยหักแผ่นลงบนกระดาษดูดซับล้างทั้งหมด 4 ครั้ง

    4. เติมสารละลายการทำงานของแอนติบอดีตรวจจับที่มีไบโอตินเลต 100μL ลงในแต่ละหลุมปิดด้วยเครื่องซีลเพลทฟักไข่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมง โดยเขย่าที่ 500 รอบต่อนาที

    5. ทำซ้ำขั้นตอนการซัก

    6. เติมสารละลายการทำงานของ HRP-streptavidin 100μL ลงในแต่ละหลุมปิดด้วยเครื่องซีลเพลทฟักไข่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที โดยเขย่าที่ 500 รอบต่อนาที

    7. ทำซ้ำขั้นตอนการซักอีกครั้ง

    8. เติมสารละลายซับสเตรต TMB 100μL ลงในแต่ละหลุมปิดด้วยเครื่องซีลเพลทฟักตัวเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ RT ป้องกันแสงของเหลวจะเปลี่ยนเป็นสีน้ำเงินโดยการเติมสารละลายซับสเตรต

    9. เติมสารละลายหยุด 50μL ลงในแต่ละหลุมของเหลวจะเปลี่ยนเป็นสีเหลืองเมื่อเติมสารละลายหยุดจากนั้นเรียกใช้เครื่องอ่านไมโครเพลทและทำการวัดที่ 450 นาโนเมตรทันที

     

    การคำนวณผลลัพธ์

    1. เฉลี่ยการอ่านค่าที่ซ้ำกันสำหรับแต่ละมาตรฐาน การควบคุม และตัวอย่าง แล้วลบค่าเฉลี่ยความหนาแน่นของแสงมาตรฐานที่เป็นศูนย์สร้างเส้นโค้งมาตรฐานที่มีการดูดกลืนแสงบนแกนแนวตั้ง (Y) และความเข้มข้น dsRNA บนแกนแนวนอน (X)

    2. ขอแนะนำให้ทำการคำนวณด้วยซอฟต์แวร์ปรับเส้นโค้งโดยใช้คอมพิวเตอร์ เช่น Curve Expert 1.3 หรือ ELISA Calc ในโมเดลแบบไม่เชิงเส้นพารามิเตอร์ 5 หรือ 4 พารามิเตอร์

    ผลงาน

    1. ความไว:

    ขีดจำกัดล่างของการตรวจจับ: ≤ 0.001pg/μL (สำหรับ UTP-, pUTP-, N1-Me-pUTP-dsRNA), ≤ 0.01pg/μL (สำหรับ 5-OMe-UTP-dsRNA)

    ขีดจำกัดล่างของการหาปริมาณ:0.0156 pg/μL (สำหรับ UTP-, pUTP-dsRNA), 0.0312 pg/μL (สำหรับ N1-Me-pUTP-dsRNA), 0.0625 pg/μL (สำหรับ 5-OMe-UTP-dsRNA)

    2. ความแม่นยำ: CV ของ Intra-Assay ≤10%, CV ของ Inter-Assay ≤10%

    3. การกู้คืน: 80% ~ 120%

    4.ความเป็นเส้นตรง:0.0156-0.5pg/μL(forUTP-,pUTP-dsRNA)0.0312-1pg/μL(forN1-Me-pUTP dsRNA),0.0625-1pg/μL(สำหรับ 5-OMe-UTP-dsRNA)

     

    ข้อควรพิจารณา

    1. อุณหภูมิและเวลาของปฏิกิริยา TMB มีความสำคัญ โปรดควบคุมตามคำแนะนำอย่างเคร่งครัด

    2. เพื่อให้ได้ความสามารถในการทำซ้ำและความไวของการทดสอบที่ดี การล้างเพลตอย่างเหมาะสมเพื่อกำจัดรีเอเจนต์ที่ไม่ทำปฏิกิริยาส่วนเกินถือเป็นสิ่งสำคัญ

    3. รีเอเจนต์ทั้งหมดควรผสมให้ละเอียดก่อนใช้งาน และหลีกเลี่ยงไม่ให้เกิดฟองระหว่างการเติมตัวอย่างหรือรีเอเจนต์

    4. หากผลึกก่อตัวขึ้นในบัฟเฟอร์ล้างแบบเข้มข้น (20x) ให้อุ่นที่อุณหภูมิ 37°C และผสมเบาๆ จนกระทั่งผลึกละลายหมด

    5. หลีกเลี่ยงการตรวจวิเคราะห์ตัวอย่างที่มีโซเดียมเอไซด์ (NaN3) เนื่องจากอาจทำลายกิจกรรมของ HRP ส่งผลให้ประเมินปริมาณ dsRNA ต่ำเกินไป

    6. หลีกเลี่ยงการปนเปื้อน RNase ในระหว่างการทดสอบ

    7. มาตรฐาน/ตัวอย่าง แอนติบอดีในการตรวจจับ และ SA-HRP ยังสามารถดำเนินการที่ RT โดยไม่เขย่า แต่อาจทำให้ความไวในการตรวจจับลดลงหนึ่งเท่าในกรณีนี้ เราขอแนะนำมาตรฐาน UTP และ pUTP dsRNA ควรเจือจางจาก 2pg/μL, มาตรฐาน N1-Me-pUTP dsRNA ควรเจือจางจาก 4pg/μL และมาตรฐาน 5-OMe-UTP dsRNA ควรเจือจางตั้งแต่ 8pg/μLนอกจากนี้ ให้บ่มสารละลายการทำงานของ HRP-streptavidin เป็นเวลา 60 นาทีที่อุณหภูมิห้องห้ามใช้เครื่องเขย่าขวด เนื่องจากเครื่องเขย่าขวดอาจทำให้ได้ผลลัพธ์ที่คลาดเคลื่อน

     

    ผลลัพธ์โดยทั่วไป

    1. ข้อมูลเส้นโค้งมาตรฐาน

    ความเข้มข้น

    (พิโกกรัม/ไมโครลิตร)

    มาตรฐาน dsRNA ที่แก้ไขแล้ว N1-Me-pUTP

    OD450-OD650(1)

    OD450-OD650(2)

    เฉลี่ย

    2

    2.8412

    2.7362

    2.7887

    1

    1.8725

    1.9135

    1.8930

    0.5

    1.0863

    1.1207

    1.1035

     

     -

    0.25

    0.623

    0.6055

    0.6143

    0.125

    0.3388

    0.3292

    0.3340

    0.0625

    0.1947

    0.1885

    0.1916

    0.0312

    0.1192

    0.1247

    0.1220

    0

    0.0567

    0.0518

    0.0543

    2. การคำนวณเส้นโค้งมาตรฐาน

    3. ช่วงการตรวจจับไลเนอร์: 0.0312- 1pg/μL

    ความเข้มข้น (พิโกกรัม/ไมโครลิตร)

    OD450-OD650

    1

    1.8930

    0.5

    1.1035

    -

    0.25

    0.6143

    0.125

    0.3340

    0.0625

    0.1916

    0.0312

    0.1220

    เขียนข้อความของคุณที่นี่แล้วส่งมาให้เรา