ชุดตรวจจีโนไทป์ของเมาส์

หมายเลขแมว: HCR2021A

ผลิตภัณฑ์นี้เป็นชุดอุปกรณ์ที่ออกแบบมาเพื่อการระบุจีโนไทป์ของเมาส์อย่างรวดเร็ว รวมถึงการสกัด DNA อย่างหยาบ และระบบขยาย PCRสามารถใช้ผลิตภัณฑ์นี้สำหรับการขยาย PCR ได้โดยตรงจากหางของหนู หู นิ้วเท้า และเนื้อเยื่ออื่นๆ หลังจากการตัดแยกอย่างง่ายโดย Lysis Buffer และ Proteinase kไม่มีการย่อยข้ามคืน การสกัดฟีนอล-คลอโรฟอร์ม หรือการทำให้คอลัมน์บริสุทธิ์ ซึ่งทำได้ง่ายและลดระยะเวลาในการทดลองผลิตภัณฑ์นี้เหมาะสำหรับการขยายชิ้นส่วนเป้าหมายสูงสุด 2kb และปฏิกิริยา PCR แบบมัลติเพล็กซ์ด้วยไพรเมอร์สูงสุด 3 คู่2×Mouse Tissue Direct PCR Mix ประกอบด้วย DNA polymerase ที่ดัดแปลงพันธุกรรม Mg²⁺, dNTP และระบบบัฟเฟอร์ที่ได้รับการปรับปรุงเพื่อให้ประสิทธิภาพการขยายสัญญาณสูงและความทนทานต่อสารยับยั้ง เพื่อให้สามารถดำเนินการปฏิกิริยา PCR ได้โดยการเพิ่มเทมเพลตและไพรเมอร์ และเติมน้ำให้กับผลิตภัณฑ์เป็น 1×ผลิตภัณฑ์ PCR ที่ขยายด้วยผลิตภัณฑ์นี้มีฐาน "A" ที่โดดเด่นที่ปลาย 3′ และสามารถนำมาใช้โดยตรงสำหรับการโคลน TA หลังการทำให้บริสุทธิ์

ส่วนประกอบ

สภาพการเก็บรักษา

ควรเก็บผลิตภัณฑ์ไว้ที่ -25~-15℃ เป็นเวลา 2 ปีหลังจากการละลาย Lysis Buffer สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2~8°C เพื่อการใช้งานหลายครั้งในระยะสั้น และผสมให้เข้ากันเมื่อใช้

แอปพลิเคชัน

ผลิตภัณฑ์นี้เหมาะสำหรับการวิเคราะห์การน็อคเอาต์ของเมาส์ การตรวจหายีน จีโนไทป์ และอื่นๆ

คุณสมบัติ

1.ใช้งานง่าย: ไม่จำเป็นต้องแยก DNA ของจีโนม

2.ใช้งานได้กว้าง: เหมาะสำหรับการขยายเนื้อเยื่อเมาส์ต่างๆ โดยตรง

คำแนะนำ

1.การปล่อยจีโนมดีเอ็นเอ

1) การเตรียมไลซีน

เนื้อเยื่อ lysate จัดทำขึ้นตามจำนวนตัวอย่างเมาส์ที่จะ lysed (ควรเตรียมเนื้อเยื่อ lysate ในสถานที่ตามปริมาณและผสมให้เข้ากันเพื่อใช้) และสัดส่วนของรีเอเจนต์ที่จำเป็นสำหรับตัวอย่างเดียวมีดังนี้:

2) การเตรียมตัวอย่างและการสลาย

การใช้เนื้อเยื่อที่แนะนำ

นำตัวอย่างเนื้อเยื่อของเมาส์ในปริมาณที่เหมาะสมในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงที่สะอาด เติมไลเซตของเนื้อเยื่อสด 200μL ลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงแต่ละหลอด กระแสน้ำวน และเขย่า จากนั้นบ่มที่ 55°C เป็นเวลา 30 นาที จากนั้นให้ความร้อนที่ 98°C เป็นเวลา 3 นาที

3) การหมุนเหวี่ยง

เขย่าไลซีนให้เข้ากันแล้วปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีส่วนลอยเหนือตะกอนสามารถใช้เป็นเทมเพลตสำหรับการขยาย PCR ได้หากจำเป็นต้องใช้แม่แบบสำหรับการจัดเก็บ ให้ย้ายส่วนเหนือตะกอนไปยังหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงที่ปลอดเชื้ออีกหลอดหนึ่ง และเก็บที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลา 2 สัปดาห์

2.การขยาย PCR

นำ 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix ออกจาก -20°C แล้วละลายบนน้ำแข็ง ผสมกลับด้าน และเตรียมระบบปฏิกิริยา PCR ตามตารางต่อไปนี้ (ทำงานบนน้ำแข็ง):

บันทึก:

ก) ปริมาณที่เพิ่มไม่ควรเกิน 1/10 ของระบบ และหากเพิ่มมากเกินไป การขยาย PCR อาจถูกยับยั้ง

เงื่อนไข PCR ที่แนะนำ

บันทึก:

ก) อุณหภูมิการหลอม: โดยอ้างอิงกับค่า Tm ของไพรเมอร์ ขอแนะนำให้ตั้งค่าอุณหภูมิการหลอมเป็นค่า Tm ที่น้อยกว่าของไพรเมอร์ +3~5℃

ปัญหาและแนวทางแก้ไขทั่วไป

1.ไม่มีแถบที่กำหนดเป้าหมาย

1) ผลิตภัณฑ์สลายสลายมากเกินไปเลือกจำนวนเทมเพลตที่เหมาะสมที่สุด โดยปกติจะไม่เกิน 1/10 ของระบบ

2) ขนาดตัวอย่างใหญ่เกินไปเจือจางไลซีน 10 ครั้ง จากนั้นขยายหรือลดขนาดตัวอย่างและสลายซ้ำ

3) ตัวอย่างเนื้อเยื่อไม่สดขอแนะนำให้ใช้ตัวอย่างเนื้อเยื่อสด

4) คุณภาพไพรเมอร์ไม่ดีใช้ DNA จีโนมในการขยายเพื่อตรวจสอบคุณภาพของไพรเมอร์และเพิ่มประสิทธิภาพการออกแบบไพรเมอร์

2.การขยายเสียงที่ไม่เฉพาะเจาะจง

1) อุณหภูมิการหลอมต่ำเกินไปและหมายเลขรอบสูงเกินไปเพิ่มอุณหภูมิการหลอมและลดจำนวนรอบ

2) ความเข้มข้นของเทมเพลตสูงเกินไปลดจำนวนเทมเพลตหรือเจือจางเทมเพลต 10 ครั้งหลังการขยาย

3) ความจำเพาะของไพรเมอร์ไม่ดีเพิ่มประสิทธิภาพการออกแบบไพรเมอร์

หมายเหตุ

1.เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามระหว่างตัวอย่าง ควรเตรียมเครื่องมือเก็บตัวอย่างหลายชิ้น และสามารถทำความสะอาดพื้นผิวของเครื่องมือด้วยสารละลายโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 2% หรือน้ำยาทำความสะอาดกรดนิวคลีอิกหลังการสุ่มตัวอย่างแต่ละครั้ง หากจำเป็นต้องใช้ซ้ำ

2.ขอแนะนำให้ใช้เนื้อเยื่อหนูสด และปริมาตรการสุ่มตัวอย่างไม่ควรใหญ่เกินไปเพื่อหลีกเลี่ยงผลกระทบต่อผลการขยาย

3.Lysis Buffer ควรหลีกเลี่ยงการละลายน้ำแข็งบ่อยครั้ง และสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2~8°C เพื่อการใช้งานหลายครั้งในระยะสั้นหากเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำ อาจเกิดการตกตะกอน และต้องละลายให้หมดก่อนใช้งาน

4.PCR Mix ควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายบ่อยครั้ง และสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C เพื่อการใช้งานซ้ำในระยะสั้น

5.ผลิตภัณฑ์นี้มีไว้สำหรับการวิจัยเชิงทดลองทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น และไม่ควรใช้ในการวินิจฉัยหรือการรักษาทางคลินิก