เอนไซม์ UDG/UNG
UDG(uracil DNA glycosylase) สามารถกระตุ้นการไฮโดรไลซิสของการเชื่อมโยง N-glycosidic ระหว่างฐาน uracil และแกนหลักน้ำตาล-ฟอสเฟตใน ssDNA และ dsDNAสามารถควบคุมมลพิษจากละอองลอยได้อย่างง่ายดาย และเหมาะสำหรับระบบอณูชีววิทยาทั่วไป เช่น PCR, qPCR, RT-qPCR และ LAMP
ข้อมูลจำเพาะ
| โฮสต์นิพจน์ | Recombinant E. coliwith uracil DNA glycosylase ยีน |
| น้ำหนักโมเลกุล | 24. 8kDa |
| ความบริสุทธิ์ | ≥95% (SDS-หน้า) |
| การปิดใช้งานความร้อน | 95°C, 5~10 นาที |
| คำจำกัดความของหน่วย | หนึ่งหน่วย (U) หมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่ต้องเร่งปฏิกิริยาไฮโดรไลซิสของ dsDNA ที่ประกอบด้วย l μg dU ใน 30 นาทีที่ 25°C |
พื้นที่จัดเก็บ
ควรเก็บผลิตภัณฑ์ไว้ที่อุณหภูมิ-25°C~-15°C เป็นเวลาสองปี
คำแนะนำ
1.การเตรียมส่วนผสมปฏิกิริยา PCR ตามระบบต่อไปนี้
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ (ไมโครลิตร) | ความเข้มข้นสุดท้าย |
| 10×บัฟเฟอร์ PCR (Mg²+บวก) | 5 | 1× |
| 25 มิลลิโมล/LMgCl | 3 | 1.5 มิลลิโมล/ลิตร |
| dUTP(10 มิลลิโมล/ลิตร) | 3 | 0.6 มิลลิโมล/ลิตร |
| DCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 มิลลิโมล/การชะล้าง) | 1 | 0.2 มิลลิโมล/การชะล้าง |
| แม่แบบดีเอ็นเอ | X | - |
| ไพรเมอร์1 (10ไมโครโมล/ลิตร) | 2 | 0.4 ไมโครโมล/ลิตร |
| ไพรเมอร์ 2 (10ไมโครโมล/ลิตร) | 2 | 0.4 ไมโครโมล/ลิตร |
| Taq DNA โพลีเมอเรส (5 U/μL) | 0. 5 | 0.05 U/ไมโครลิตร |
| ยูราซิล ดีเอ็นเอ ไกลโคซิเลส (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 ยู/ไมโครลิตร |
| ddH₂O | มากถึง 50 | - |
บันทึก: ตามข้อกำหนดในการทดลอง ความเข้มข้นสุดท้ายของ dUTP สามารถปรับได้ระหว่าง 0.2-0.6 มิลลิโมล/ลิตร และสามารถเลือกเติม dTTP 0.2 มิลลิโมล/ลิตรได้
2.ขั้นตอนการขยายเสียง
| ขั้นตอนวงจร | อุณหภูมิ | เวลา | รอบ |
| การย่อยสลายเทมเพลตที่มี dU | 25 ℃ | 10 นาที | 1 |
| การเปิดใช้งาน UDG เทมเพลตการสูญเสียสภาพเริ่มต้น | 95 ℃ | 5~10นาที | 1 |
| การเสียสภาพ | 95 ℃ | 10 วินาที |
30-35 |
| การหลอม | 60 ℃ | 20 วินาที | |
| ส่วนขยาย | 72 ℃ | 30 วินาที/กิโลไบต์ | |
| ส่วนขยายสุดท้าย | 72 ℃ | 5 นาที | 1 |
บันทึก: เวลาตอบสนองที่อุณหภูมิ 25°C สามารถปรับได้ภายใน 5-10 นาที ตามความต้องการในการทดลอง
หมายเหตุ
1.UDG ทำงานในบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา PCR ส่วนใหญ่
2.เอนไซม์ควรเก็บไว้ในกล่องน้ำแข็งหรือในอ่างน้ำแข็งเมื่อใช้ และควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C ทันทีหลังการใช้งาน
3.โปรดสวมชุด PPE ที่จำเป็น เสื้อกาวน์และถุงมือดังกล่าว เพื่อสุขภาพและความปลอดภัยของคุณ!
