BspQI
BspQI สามารถแสดงออกแบบรีคอมบิแนนท์ใน E. coli ที่สามารถจดจำตำแหน่งเฉพาะและผลิตภายใต้
BspQI ซึ่งเป็น endonuclease ที่ถูกจำกัดของ IIs นั้นได้มาจากสายพันธุ์ E. coli ชนิดรีคอมบิแนนท์ที่นำพายีน BspQI ที่ถูกโคลนและดัดแปลงจาก Bacillus sphaericusสามารถจดจำตำแหน่งเฉพาะได้ และลำดับการจดจำและตำแหน่งรอยแยกมีดังนี้:
5' · · · ·GCCTTC(N) · · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
คุณสมบัติของสินค้า
1. มีกิจกรรมสูง การย่อยอาหารเร็ว
2. กิจกรรมดาวต่ำ ทำให้มั่นใจในการตัดที่แม่นยำเช่น “มีดผ่าตัด”;
3. ไม่มี BSA และปลอดจากสัตว์
ความไวของเมทิลเลชั่น
Dฉันคือเมทิลเลชัน:ไม่ละเอียดอ่อน;
Dซม. เมทิลเลชั่น:ไม่ละเอียดอ่อน;
CpG เมทิลเลชัน:ไม่ละเอียดอ่อน;
สภาพการเก็บรักษา
ควรจัดส่งผลิตภัณฑ์ ≤ 0 ℃;เก็บที่อุณหภูมิ -25~- 15°C
บัฟเฟอร์การจัดเก็บข้อมูล
Tris-HCl 20 มิลลิโมลาร์, EDTA 0.1 มิลลิโมลาร์, KCl 500 มิลลิโมลาร์, ไดไทโอไทรทอล 1.0 มิลลิโมลาร์, อัลบูมินรีคอมบิแนนท์ 500 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, 0. ไทรชั่น X 1% - 100 และกลีเซอรอล 50% (pH 7.0 @ 25°C)
คำจำกัดความของหน่วย
หนึ่งหน่วยหมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการย่อย DNA ควบคุมภายใน 1 ไมโครกรัมใน 1 ชั่วโมงที่ 50°C ในปริมาตรปฏิกิริยารวม 50 ไมโครลิตร
ควบคุมคุณภาพ
การทดสอบความบริสุทธิ์ของโปรตีน (SDS-PAGE):ความบริสุทธิ์ของ BspQI อยู่ที่ ≥95% กำหนดโดยการวิเคราะห์ SDS-PAGE
อาร์เนส:10U ของ BspQI ที่มี 1.6μg MS2 RNA เป็นเวลา 4 ชั่วโมงที่ 50°C จะไม่เกิดการย่อยสลายตามที่กำหนดโดย agarose gel electrophoresis
กิจกรรม DNase ที่ไม่เฉพาะเจาะจง:10U ของ BspQI ที่มี 1μg แล DNA ที่ 50°C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง เทียบกับ 50°° เป็นเวลา 1 ชั่วโมง จะไม่ให้ผลลัพธ์ DNA ส่วนเกินตามที่กำหนดโดย agarose gel electrophoresis
การผูกมัดและการตัดใหม่:หลังจากการย่อย 1 μg แลDNA ด้วย 10U BspQI แล้ว ชิ้นส่วน DNA สามารถผูกมัดด้วย T4 DNA ligase ที่อุณหภูมิ 16°Cและแฟรกเมนต์ที่ถูกผูกมัดเหล่านี้สามารถตัดใหม่ได้ด้วย BspQI
อี. โคไล ดีเอ็นเอ: การตรวจจับ TaqMan qPCR เฉพาะของ E. coli 16s rDNA แสดงให้เห็นว่าจีโนมตกค้างของ E.coli ≤ 0.1pg/ul
โฮสต์โปรตีนตกค้าง:≤ 50 แผ่นต่อนาที
แบคทีเรีย เอนโดท็อกซิน: การทดสอบ LAL ตาม Chinese Pharmacopoeia IV 2020 ฉบับวิธีทดสอบขีดจำกัดของเจล กฎทั่วไป (1143)ปริมาณเอนโดทอกซินของแบคทีเรียควรอยู่ที่ ≤10 EU/มก.
ระบบปฏิกิริยาและสภาวะ
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ |
| BspQ I(10 U/ไมโครลิตร) | 1 ไมโครลิตร |
| ดีเอ็นเอ | 1 มก |
| 10 x BspQ ฉันบัฟเฟอร์ | 5 ไมโครลิตร |
| วว H2O | มากถึง 50 ไมโครลิตร |
เงื่อนไขการเกิดปฏิกิริยา: 50 ℃, 1~ 16 ชม.
การระงับความร้อน：80°C เป็นเวลา 20 นาที
ระบบและสภาวะของปฏิกิริยาที่แนะนำสามารถให้ผลการย่อยของเอนไซม์ค่อนข้างดี ซึ่งใช้สำหรับการอ้างอิงเท่านั้น โปรดดูรายละเอียดที่ผลการทดลอง
การประยุกต์ใช้ผลิตภัณฑ์
การจำกัดการย่อยเอนโดนิวคลีเอส การโคลนนิ่งอย่างรวดเร็ว
หมายเหตุ
1. ปริมาตรของเอนไซม์ ≤ 1/10 ของปริมาตรปฏิกิริยา
2. กิจกรรมของดวงดาวอาจเกิดขึ้นเมื่อความเข้มข้นของกลีเซอรอลมากกว่า 5%
3. กิจกรรมการแตกแยกอาจเกิดขึ้นเมื่อพื้นผิวต่ำกว่าอัตราส่วนที่แนะนำ
