โปรตีน K NGS (ผง)

หมายเลขแมว: HC4507A

บรรจุภัณฑ์: 1g/10g/100g/500g

ปราศจาก DNase, RNase, Nickase

กิจกรรม: ≥40 U/มก

กรดนิวคลีอิกตกค้าง: ≤ 5 พิโกกรัม/มก

ภาระทางชีวภาพ: ≤ 50 CFU/g

อายุการเก็บรักษา 3 ปี

การขนส่งในอุณหภูมิห้อง

ความจุ 1 ชุด 30 กก

ส่งคำถาม

รายละเอียดสินค้า

รายละเอียดผลิตภัณฑ์

ข้อมูล

หมายเลขแมว: HC4507A

NGS Protease K เป็นซีรีนโปรตีเอสที่เสถียรซึ่งมีการทำงานของเอนไซม์สูงและความจำเพาะของสารตั้งต้นที่กว้าง เอนไซม์จะสลายพันธะเอสเทอร์และพันธะเปปไทด์ที่อยู่ติดกับปลาย C ของกรดอะมิโนที่ไม่ชอบน้ำ กรดอะมิโนที่ประกอบด้วยกำมะถัน และกรดอะมิโนอะโรมาติกดังนั้นจึงมักใช้เพื่อย่อยสลายโปรตีนให้เป็นเปปไทด์สั้นNGS Protease K เป็นซีรีนโปรตีเอสทั่วไปที่มี Asp₃₉-ของเขา₆₉-เซอร์₂₂₄catalytic triad ซึ่งมีลักษณะเฉพาะของ serine proteases และศูนย์ catalytic ล้อมรอบด้วย tow Ca²⁺ตำแหน่งการจับตัวเพื่อความคงตัว รักษาการทำงานของเอนไซม์ให้อยู่ในระดับสูงภายใต้เงื่อนไขที่หลากหลาย

ก่อนหน้า: ไลโซไซม์ HC8120D

ต่อไป: โปรตีเอสเค (ผงไลโอฟิไลซ์) HC4500A

ข้อมูลจำเพาะ

รูปร่าง	ผงอสัณฐานสีขาวถึงสีขาวนวลไลโอฟิไลซ์
กิจกรรมเฉพาะ	≥40U/มก. ของแข็ง
ดีเนส	ไม่พบสิ่งใดเลย
อาร์เนส	ไม่พบสิ่งใดเลย
ภาระทางชีวภาพ	≤50CFU/กรัมของแข็ง
สารตกค้างของกรดนิวคลีอิก	<5pg/มก. ของแข็ง

คุณสมบัติ

แหล่งที่มา	อัลบั้ม ไตรติราเชียม
หมายเลขอีซี	3.4.21.64(รีคอมบิแนนท์จากอัลบั้มไตรติราเชียม)
น้ำหนักโมเลกุล	29kDa (SDS-PAGE)
จุดไอโซอิเล็กทริก	7.81 รูปที่ 1
ค่า pH ที่เหมาะสม	7.0-12.0 (ทั้งหมดมีกิจกรรมสูง) รูปที่ 2
อุณหภูมิที่เหมาะสม	65°C รูปที่ 3
ความคงตัวของค่า pH	pH 4.5-12.5 (25°C,16ชม.) รูปที่ 4
เสถียรภาพทางความร้อน	ต่ำกว่า 50°C (pH 8.0, 30 นาที) รูปที่ 5
ความเสถียรในการจัดเก็บ	เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 25°C เป็นเวลา 12 เดือน รูปที่ 6
ตัวกระตุ้น	SDS, ยูเรีย
สารยับยั้ง	ไดไอโซโพรพิลฟลูออโรฟอสเฟต;เบนซิลซัลโฟนิลฟลูออไรด์

สภาพการเก็บรักษา

เก็บผงแช่เยือกแข็งที่อุณหภูมิ -25 ~ -15 ℃ เป็นเวลานานห่างจากแสงหลังจากการละลาย ให้แบ่งในปริมาณที่เหมาะสมสำหรับการเก็บรักษาระยะสั้นที่อุณหภูมิ 2-8°C ห่างจากแสงหรือระยะยาว -25~-15°C ห่างจากแสง

ข้อควรระวัง

สวมถุงมือและแว่นตาป้องกันเมื่อใช้หรือชั่งน้ำหนัก และจัดให้มีการระบายอากาศที่ดีหลังการใช้งานผลิตภัณฑ์นี้อาจก่อให้เกิดอาการแพ้ทางผิวหนังและการระคายเคืองต่อดวงตาอย่างรุนแรงหากสูดดมเข้าไปอาจทำให้เกิดอาการภูมิแพ้ หอบหืด หรือหายใจลำบากได้อาจระคายเคืองต่อทางเดินหายใจ.

คำจำกัดความของหน่วย

NGS Protease K หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการไฮโดรไลซ์เคซีนให้เป็น L-ไทโรซีน 1 ไมโครโมลภายใต้เงื่อนไขการกำหนดมาตรฐาน

การเตรียมรีเอเจนต์

รีเอเจนต์	ผู้ผลิต	แคตตาล็อก
เทคนิคเคซีนจากนมวัว	ซิกม่า อัลดริช	C7078
NaOH	ซิโนฟาร์มเคมีบริษัท รีเอเจนต์ จำกัด	10019762
NaH₂PO₄·2H₂O	ซิโนฟาร์มเคมีบริษัท รีเอเจนต์ จำกัด	20040718
Na2HPO4	ซิโนฟาร์มเคมีบริษัท รีเอเจนต์ จำกัด	20040618
กรดไตรคลอโรอะซิติก	ซิโนฟาร์มเคมีบริษัท รีเอเจนต์ จำกัด	80132618
โซเดียมอะซิเตท	ซิโนฟาร์มเคมีบริษัท รีเอเจนต์ จำกัด	10018818
กรดน้ำส้ม	ซิโนฟาร์มเคมีบริษัท รีเอเจนต์ จำกัด	10000218
เอชซีแอล	ซิโนฟาร์มเคมีบริษัท รีเอเจนต์ จำกัด	10011018
โซเดียมคาร์บอเนต	ซิโนฟาร์มเคมีบริษัท รีเอเจนต์ จำกัด	10019260
โฟลีนฟีนอล	ซานกอน ไบโอเทค (เซี่ยงไฮ้)จำกัด.	A500467-0100
แอล-ไทโรซีน	ซิกมา	93829

รีเอเจนต์ I:

สารตั้งต้น: เคซีน 1% จากสารละลายนมวัว: ละลายเคซีนนมวัว 1 กรัมในสารละลายโซเดียมฟอสเฟต 0.1 โมลาร์ 50 มล., pH 8.0, อุ่นในอ่างน้ำที่ 65-70 °C เป็นเวลา 15 นาที คนและละลาย ปล่อยให้เย็นด้วยน้ำ ปรับด้วย โซเดียมไฮดรอกไซด์เป็น pH 8.0 และเจือจางเป็น 100 มล.

รีเอเจนต์ II:

สารละลาย TCA: กรดไตรคลอโรอะซิติก 0.1 โมลาร์, โซเดียมอะซิเตต 0.2 โมลาร์ และกรดอะซิติก 0.3 โมลาร์ (โดยมีน้ำหนักกรดไตรคลอโรอะซิติก 1.64 กรัม + โซเดียมอะซิเตต 1.64 กรัม + กรดอะซิติก 1.724 มล. ตามลำดับ เติมน้ำปราศจากไอออน 50 มล. ปรับด้วย HCl ให้เป็น pH 4.03 และเจือจางลงใน 100มล.)

รีเอเจนต์ III:

สารละลายโซเดียมคาร์บอเนต 0.4 ม. (หนัก 4.24 ก. ปราศจากโซเดียมคาร์บอเนตและละลายในน้ำ 100 มล.)

รีเอเจนต์ IV:

รีเอเจนต์โฟลินฟีนอล: เจือจาง 5 ครั้งด้วยน้ำปราศจากไอออน

รีเอเจนต์ V:

สารเจือจางเอนไซม์: สารละลายโซเดียมฟอสเฟต 0.1 โมลาร์, pH 8.0

รีเอเจนต์ VI:

สารละลายมาตรฐานแอล-ไทโรซีน:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 ไมโครโมล/มล. L-ไทโรซีนละลายด้วย 0.2M HCl

ขั้นตอน

1. เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-Vis และเลือกการวัดโฟโตเมตริก

2. ตั้งค่าความยาวคลื่นเป็น 660 นาโนเมตร

3. เปิดอ่างน้ำ ตั้งอุณหภูมิเป็น 37°C ตรวจสอบให้แน่ใจว่าอุณหภูมิไม่เปลี่ยนแปลงเป็นเวลา 3-5 นาที

4. เปิดความร้อนซับสเตรต 0.5 มล. ในหลอดสำหรับหมุนเหวี่ยงขนาด 2 มล. ที่อ่างน้ำอุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 10 นาที

5. สกัดสารละลายเอนไซม์เจือจาง 0.5 มล. ลงในหลอดสำหรับการปั่นแยกที่อุ่นไว้เป็นเวลา 10 นาทีตั้งสารเจือจางของเอนไซม์เป็นกลุ่มว่าง

6. เติมน้ำยา TCA 1.0 มล. ทันทีหลังปฏิกิริยาผสมให้เข้ากันแล้วบ่มในอ่างน้ำเป็นเวลา 30 นาที

7. สารละลายปฏิกิริยาหมุนเหวี่ยง

8. เพิ่มส่วนประกอบต่อไปนี้ตามลำดับที่ระบุ

รีเอเจนต์	ปริมาณ
เหนือตะกอน	0.5 มล
0.4M โซเดียมคาร์บอเนต	2.5 มล
รีเอเจนต์โฟลินฟีนอล	0.5 มล

9. ผสมให้เข้ากันก่อนนำไปบ่มในอ่างน้ำอุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที

10. อ.ย₆₆₀ถูกกำหนดให้เป็น OD₁-กลุ่มควบคุมเปล่า: ใช้ตัวเจือจางเอนไซม์แทนสารละลายเอนไซม์เพื่อหาค่า OD₆₆₀เป็น OD₂, ∆OD=OD₁-OD₂.

11. เส้นโค้งมาตรฐาน L-ไทโรซีน: สารละลาย L-ไทโรซีนที่มีความเข้มข้นต่างกัน 0.5 มล., โซเดียมคาร์บอเนต 2.5 มล. 0.4 ม., รีเอเจนต์โฟลินฟีนอล 0.5 มล. ในหลอดหมุนเหวี่ยงขนาด 5 มล. บ่มใน 37 ℃ เป็นเวลา 30 นาที ตรวจหา OD₆₆₀สำหรับความเข้มข้นที่แตกต่างกันของ L-ไทโรซีน จากนั้นได้เส้นโค้งมาตรฐาน Y=kX+b โดยที่ Y คือความเข้มข้นของ L-ไทโรซีน X คือ OD₆₀₀.

การคำนวณ

2: ปริมาตรรวมของสารละลายปฏิกิริยา (มล.)

0.5: ปริมาตรของสารละลายเอนไซม์ (มล.)

0.5: ปริมาตรของเหลวของปฏิกิริยาที่ใช้ในการกำหนดปริมาณโครโมเจนิก (มล.)

10: เวลาปฏิกิริยา (นาที)

Df: เจือจางหลายเท่า

C: ความเข้มข้นของเอนไซม์ (มก./มล.)

ตัวเลข

รูปที่ 1 DNA ตกค้าง

ตัวอย่าง	อเวนิว C4	กรดนิวคลีอิค ฟื้นตัว(พิโกกรัม/มก.)	การกู้คืน(%)	นิวคลีอิกทั้งหมด กรด ( พิโกกรัม/มก.)
สาธารณรัฐประชาชนจีน	24.66	2.23	83%	2.687
PRK+STD2	18.723	126.728	-	-
STD1	12.955	-	-	-
STD2	16
STD3	19.125
STD4	23.135
STD5	26.625
H2O ปราศจาก RNA	บึกบึน	-	-	-