รีเอเจนต์การปลดปล่อยตัวอย่าง
รีเอเจนต์การปลดปล่อยตัวอย่างใช้สำหรับสถานการณ์การวินิจฉัย POCT ระดับโมเลกุลสำหรับระบบสองระบบ ได้แก่ Direct Amplification LAMP และ Direct Amplification PCR ไม่จำเป็นต้องสกัดกรดนิวคลีอิกไลซีนที่หยาบของตัวอย่างสามารถขยายได้โดยตรง สามารถตรวจจับยีนเป้าหมายได้อย่างแม่นยำ ลดเวลาในการตรวจจับตัวอย่างให้สั้นลงอีก ซึ่งตรงกับข้อกำหนดการใช้งานของ POCT ระดับโมเลกุลอย่างสมบูรณ์แบบเหมาะสำหรับผ้าเช็ดจมูก ผ้าเช็ดคอ และตัวอย่างประเภทอื่นๆตัวอย่างที่ผ่านการประมวลผลสามารถนำมาใช้โดยตรงสำหรับการตรวจจับ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงหรือ LAMP แบบเรียลไทม์ และให้ผลลัพธ์เช่นเดียวกับวิธีการสกัดแบบเดิมๆ โดยไม่ต้องดำเนินการสกัดกรดนิวคลีอิกที่ซับซ้อน
สภาพการเก็บรักษา
ขนส่งและจัดเก็บที่อุณหภูมิห้อง
ควบคุมคุณภาพ
การตรวจจับเชิงฟังก์ชัน – qPCR เชิงปริมาณ: ระบบรีเอเจนต์การปลดปล่อยตัวอย่าง 800μl ได้รับการขยาย
ด้วยสำเนา Novel Pseudovirus 1,000 ชุด ตัวอย่างผ้าเช็ดจมูก 1 ตัวอย่าง ทำให้เกิดเส้นโค้งการขยายที่คล้ายกัน และค่า ΔCt ภายใน ± 0.5 Ct
ขั้นตอนการทดลองความละเอียด
1. นำรีเอเจนต์สำหรับปล่อยตัวอย่างขนาด 800 ไมโครลิตร แล้วกระจายสารละลายสลายลงในหลอดเก็บตัวอย่างขนาด 1.5 มล.
2. ใช้ผ้าเช็ดล้างจมูกหรือผ้าเช็ดลำคอด้วยผ้าเช็ดทำความสะอาด ขั้นตอนการสุ่มตัวอย่างผ้าเช็ดจมูก: นำผ้าฆ่าเชื้อแล้วสอดเข้าไปในรูจมูก ค่อยๆ เลื่อนไปลึกประมาณ 1.5 ซม. ค่อยๆ หมุน 4 ครั้งกับเยื่อบุจมูกเป็นเวลามากกว่า 15 วินาที จากนั้นทำซ้ำการผ่าตัดเดียวกันกับโพรงจมูกอีกข้างด้วยไม้กวาดอันเดียวกัน ขั้นตอนการเก็บตัวอย่างไม้กวาดคอ: ใช้ไม้กวาดฆ่าเชื้อแล้วค่อยๆ เช็ดต่อมทอนซิลคอหอยและผนังคอหอยด้านหลังอย่างรวดเร็ว 3 ครั้ง
3.วางสำลีลงในหลอดเก็บตัวอย่างทันทีควรหมุนหัวสำลีและผสมในสารละลายจัดเก็บเป็นเวลาอย่างน้อย 30 วินาทีเพื่อให้แน่ใจว่าตัวอย่างได้รับการชะล้างจนหมดในหลอดเก็บตัวอย่าง
4. ฟักตัวที่อุณหภูมิห้อง (20~ 25°C) เป็นเวลา 1 นาที การเตรียมบัฟเฟอร์สลายจะเสร็จสิ้น
5. RT-PCR และ RT-LAMP ของระบบ 25μl และ RT-LAMP เข้ากันได้กับการเพิ่มเทมเพลตจำนวน 10μl สำหรับการทดลองการตรวจจับ
หมายเหตุ
1. ปริมาณไลซีนโดยตรงของตัวอย่างขั้นต่ำที่สอดคล้องกับไม้กวาดเดี่ยวสามารถปรับได้ที่400μl ซึ่งสามารถปรับได้ตามความต้องการในการทดสอบ
2. เมื่อตัวอย่างประมวลผลโดยรีเอเจนต์สำหรับปล่อยตัวอย่าง แนะนำให้ดำเนินการทดสอบขั้นต่อไปโดยเร็วที่สุด โดยควรมีช่วงเวลารอน้อยกว่า 1 ชั่วโมง
3. ค่า pH ของไลเซตตัวอย่างมีสภาพเป็นกรด และระบบการตรวจจับจำเป็นต้องมีบัฟเฟอร์จำนวนหนึ่งเหมาะสำหรับการตรวจจับเรืองแสง PCR, RT-PCR และ LAMP ส่วนใหญ่ที่มีบัฟเฟอร์ pH แต่ไม่เหมาะสำหรับการตรวจจับการวัดสีด้วย LAMP ที่ไม่มีบัฟเฟอร์
