ชุดสกัด DNA/RNA ของไวรัส
ชุดนี้เหมาะสำหรับการสกัดอย่างรวดเร็วของ DNA/RNA ของไวรัสที่มีความบริสุทธิ์สูงจากตัวอย่าง เช่น ไม้กวาดโพรงจมูก, ไม้กวาดสิ่งแวดล้อม, ส่วนลอยเหนือตะกอนจากการเพาะเลี้ยงเซลล์ และส่วนลอยเหนือตะกอนที่เป็นเนื้อเดียวกันของเนื้อเยื่อชุดอุปกรณ์นี้ใช้เทคโนโลยีการทำให้บริสุทธิ์เมมเบรนซิลิกา ซึ่งช่วยลดความจำเป็นในการใช้ตัวทำละลายอินทรีย์ฟีนอล/คลอโรฟอร์ม หรือการตกตะกอนของแอลกอฮอล์ที่ใช้เวลานานเพื่อสกัด DNA/RNA ของไวรัสที่มีคุณภาพสูงกรดนิวคลีอิกที่ได้รับนั้นปราศจากสิ่งเจือปนและพร้อมสำหรับใช้ในการทดลองขั้นปลาย เช่น Reverse Transcription, PCR, RT-PCR, PCR แบบเรียลไทม์, Next-Generation Sequencing (NGS) และ Northern blot
สภาพการเก็บรักษา
เก็บที่อุณหภูมิ 15 ~ 25 ℃ และขนส่งที่อุณหภูมิห้อง
ส่วนประกอบ
| ส่วนประกอบ | 100RXNS |
| บัฟเฟอร์ VL | 50 มล |
| บัฟเฟอร์ RW | 120 มล |
| ปราศจาก RNase ddH2 O | 6 มล |
| คอลัมน์ FastPure RNA | 100 |
| หลอดคอลเลกชัน (2 มล.) | 100 |
| หลอดเก็บไร้ RNase (1 .5 มล.) | 100 |
บัฟเฟอร์ VL:จัดให้มีสภาพแวดล้อมสำหรับการสลายและการรวมตัว
บัฟเฟอร์ RW:ขจัดโปรตีนที่ตกค้างและสิ่งสกปรกอื่นๆ
ddH2O ที่ปราศจาก RNase:ชะล้าง DNA/RNA จากเมมเบรนในคอลัมน์หมุน
คอลัมน์ FastPure RNA:ดูดซับ DNA/RNA โดยเฉพาะ
หลอดคอลเลกชัน 2 มล.:รวบรวมสารกรอง
หลอดเก็บตัวอย่างไร้ RNase 1.5 มล.:รวบรวม DNA/RNA
การใช้งาน
ไม้กวาดโพรงจมูก, ไม้กวาดสิ่งแวดล้อม, ส่วนลอยเหนือตะกอนของการเพาะเลี้ยงเซลล์ และส่วนเหนือตะกอนที่เป็นเนื้อเดียวกันของเนื้อเยื่อ
แม่เตรียมเองials
ทิปปิเปตปลอด RNase, หลอดสำหรับหมุนเหวี่ยงปลอด RNase ขนาด 1.5 มล., เครื่องหมุนเหวี่ยง, เครื่องผสมวอร์เท็กซ์ และปิเปต
กระบวนการทดลอง
ทำตามขั้นตอนทั้งหมดต่อไปนี้ในตู้ความปลอดภัยทางชีวภาพ
1. เติมตัวอย่าง 200 µl ลงในหลอดสำหรับการหมุนเหวี่ยงแบบไม่มี RNase (เติม PBS หรือ NaCl 0.9% ในกรณีที่ตัวอย่างไม่เพียงพอ) เติม Buffer VL 500 µl ผสมให้เข้ากันโดยการหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 15 – 30 วินาที แล้วปั่นแยก สั้น ๆ เพื่อรวบรวมส่วนผสมที่ด้านล่างของหลอด
2. วางคอลัมน์ FastPure RNA ในหลอดคอลเลกชัน 2 มล.ย้ายของผสมจากขั้นตอนที่ 1 ไปยังคอลัมน์ FastPure RNA ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาที (13,400 × g) เป็นเวลา 1 นาที และทิ้งสิ่งกรองออก
3. เติม Buffer RW 600 μl ลงในคอลัมน์ FastPure RNA ปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาที (13,400 × g) เป็นเวลา 30 วินาที และทิ้งสารกรองออก
4. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 3
5. ปั่นเหวี่ยงคอลัมน์เปล่าที่ 12,000 รอบต่อนาที (13,400 × g) เป็นเวลา 2 นาที
6. ย้ายคอลัมน์ FastPure RNA อย่างระมัดระวังลงในหลอดคอลเลกชันปลอด RNase ใหม่ขนาด 1.5 มล. (ที่ให้มาในชุด) และเพิ่ม ddH2O ปลอด RNase 30 – 50 μl ไปที่กึ่งกลางของเมมเบรนโดยไม่ต้องสัมผัสคอลัมน์ปล่อยให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 นาที และปั่นแยกที่ 12,000 รอบต่อนาที (13,400 × g) เป็นเวลา 1 นาที
7. ทิ้งคอลัมน์ FastPure RNADNA/RNA สามารถใช้โดยตรงสำหรับการตรวจวิเคราะห์ครั้งต่อไป หรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -30~ -15°C ในช่วงเวลาสั้นๆ หรือ -85 ~-65°C เป็นระยะเวลานานขึ้น
หมายเหตุ
สำหรับใช้ในการวิจัยเท่านั้นไม่ใช้สำหรับขั้นตอนการวินิจฉัย
1. ปรับตัวอย่างให้สมดุลกับอุณหภูมิห้องล่วงหน้า
2. ไวรัสสามารถแพร่เชื้อได้สูงโปรดตรวจสอบให้แน่ใจว่าได้ใช้มาตรการป้องกันด้านความปลอดภัยที่จำเป็นทั้งหมดก่อนการทดลอง
3. หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายตัวอย่างซ้ำๆ เนื่องจากอาจนำไปสู่การย่อยสลายหรือทำให้ผลผลิต DNA/RNA ของไวรัสที่ถูกสกัดลดลง
4. อุปกรณ์ที่จัดเตรียมเอง ได้แก่ ทิปปิเปตปลอด RNase, หลอดสำหรับหมุนเหวี่ยงปลอด RNase ขนาด 1.5 มล., เครื่องหมุนเหวี่ยง, เครื่องผสม vortex และปิเปต
5. เมื่อใช้ชุดอุปกรณ์ ให้สวมเสื้อกาวน์แล็บ ถุงมือยางแบบใช้แล้วทิ้ง และหน้ากากแบบใช้แล้วทิ้ง และใช้วัสดุสิ้นเปลืองที่ปราศจาก RNase เพื่อลดความเสี่ยงของการปนเปื้อน RNase
6. ทำตามขั้นตอนทั้งหมดที่อุณหภูมิห้อง เว้นแต่จะระบุไว้เป็นอย่างอื่น
กลไกและขั้นตอนการทำงาน
