2×Sensi Direct Premix-UNG (โพรบ qPCR)
หมายเลขแมว: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ได้รับการออกแบบมาเพื่อดำเนินการ PCR โดยตรงจากตัวอย่าง โดยไม่ต้องสกัด DNA หรือการเตรียมตัวอย่างรีเอเจนต์นี้ประกอบด้วย DNA polymerase ที่เริ่มร้อน, uracil DNA glycosylase (UNG), สารยับยั้ง RNase, MgCl2, dNTP (ที่มี dUTP แทน dTTP) และความคงตัว สำหรับ PCR เชิงปริมาณ (qPCR)รีเอเจนต์นี้มีความทนทานต่อสารยับยั้งสูง จึงสามารถนำไปใช้กับการตรวจจับตัวอย่างได้โดยตรง เช่น ผ้าเช็ดลำคอ น้ำลาย เลือดครบส่วนที่ป้องกันการแข็งตัวของเลือด พลาสมา และซีรัมโดยไม่ต้องสกัด DNAรีเอเจนต์ใช้บัฟเฟอร์ที่เป็นกรรมสิทธิ์สำหรับ qPCR พร้อมด้วยเอนไซม์ผสมของ DNA polymerase ที่ต้านการยับยั้งและเอนไซม์ UNGดังนั้นจึงสามารถรับการขยายที่ดีของยีนเป้าหมายในตัวอย่างที่มีสารยับยั้ง และยับยั้งการขยายผลบวกลวงที่เกิดจากมลพิษ PCR ที่ตกค้างและละอองลอยรีเอเจนต์นี้เข้ากันได้กับเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงส่วนใหญ่ เช่น Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche และอื่นๆ
ส่วนประกอบ
1. 50×เอนไซม์ SensiDirect/ส่วนผสม UNG
2. 2×บัฟเฟอร์พรีมิกซ์ SensiDirect (dUTP)
สภาพการเก็บรักษา
ส่วนประกอบทั้งหมดควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C เพื่อการเก็บรักษาระยะยาว และ 4°C ได้นานถึง 3 เดือนกรุณาผสมให้ละเอียดหลังจากการละลายและปั่นแยกก่อนใช้หลีกเลี่ยงการแช่แข็ง-ละลายบ่อยๆ
โปรโตคอลการปั่นจักรยาน
| ขั้นตอน | อุณหภูมิ | เวลา | วงจร |
| การย่อย | 50 ℃ | 2 นาที | 1 |
| การเปิดใช้งานโพลีเมอเรส | 95 ℃ | 1-5 นาที | 1 |
| การเสียสภาพ | 95 ℃ | 10-20ส | 40-50 |
| การหลอม/การขยาย | 56-64 ℃ | 20-60ส |
คำแนะนำในการปิเปต
| รีเอเจนต์ | ปริมาณต่อ ปฏิกิริยา | ปริมาตรต่อปฏิกิริยา | ความเข้มข้นสุดท้าย |
| 2×บัฟเฟอร์พรีมิกซ์ SensiDirect (dUTP) | 12.5ไมโครลิตร | 25ไมโครลิตร | 1× |
| 50×ผสมเอนไซม์ SensiDirect/UNG | 0.5ไมโครลิตร | 1ไมโครลิตร | 1× |
| 25×ไพรเมอร์-โพรบผสม1, 2 | 1ไมโครลิตร | 2ไมโครลิตร | 1× |
| ตัวอย่าง3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| ปริมาณรวม | 25 ไมโครลิตร | 50 ไมโครลิตร | - |
1. ความเข้มข้นสุดท้ายของไพรเมอร์มักจะอยู่ที่0.2μMเพื่อผลลัพธ์ที่ดีกว่า สามารถปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ให้เหมาะสมได้ภายในช่วง 0.2-1μM
2. โดยทั่วไป ความเข้มข้นของโพรบสามารถปรับให้เหมาะสมภายในช่วง 0.1-0.3μMความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุดของโพรบนั้นสัมพันธ์กับเครื่องมือขยาย PCR แบบเรียลไทม์ ประเภทของโพรบ และประเภทของสารติดฉลากฟลูออเรสเซนต์โปรดดูคู่มือเครื่องมือหรือข้อกำหนดเฉพาะของโพรบฟลูออเรสเซนต์แต่ละอัน
3. ตัวอย่างประเภทต่างๆ มีประเภทและเนื้อหาของสารยับยั้งและจำนวนสำเนาของยีนเป้าหมายที่แตกต่างกันควรพิจารณาปริมาตรตัวอย่างตามสภาพจริงเจือจางตัวอย่างโดยเติมน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอสหรือบัฟเฟอร์ TE หากจำเป็น
4. ปริมาณตัวอย่างที่แนะนำ:
| ตัวอย่าง | ปริมาณอันละ 50 ไมโครลิตร ปฏิกิริยา | ขีดสุด อัตราส่วน |
| เลือดครบส่วนต้านการแข็งตัวของเลือด | 2.5 ไมโครลิตร | 5% |
| พลาสมา | 15 ไมโครลิตร | 30% |
| เซรั่ม | 10 ไมโครลิตร | 20% |
| ไม้กวาดคอ | 10 ไมโครลิตร | 20% |
| น้ำลาย | 10 ไมโครลิตร | 20% |
ควบคุมคุณภาพ
1. การตรวจจับฟังก์ชัน: ความไว ความจำเพาะ และการทำซ้ำของ qPCR
2. ไม่มีกิจกรรมของนิวคลีเอสจากภายนอก: ไม่มีมลพิษของเอนโดนิวคลีเอสและเอ็กโซนิวคลีเอสจากภายนอก
หมายเหตุของผลิตภัณฑ์
1. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้ DNA polymerase ที่เริ่มร้อนชนิดใหม่ ซึ่งสามารถเปิดใช้งานได้ภายใน 1-5 นาที เนื่องจากบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาได้รับการปรับปรุงให้เหมาะสม จึงเหมาะสำหรับ PCR เชิงปริมาณฟลูออเรสเซนซ์สองเท่าหรือหลายตัวโดยใช้วิธีการสอบสวน
2. หากค่า Rn ของการขยาย PCR ต่ำเกินไปหรือยับยั้งการขยายอย่างเห็นได้ชัด การลดจำนวนตัวอย่าง การเพิ่มปริมาตรของปฏิกิริยา หรือการเจือจางตัวอย่างก่อนหน้านี้อาจช่วยปรับปรุงผลลัพธ์ได้
3. การเก็บเลือด น้ำลาย ปัสสาวะ ไม้เช็ดลำคอ ฯลฯ ควรเป็นไปตามข้อกำหนดทางคลินิก และสามารถใช้ตัวอย่างสดเพื่อป้องกันการสลายตัวของกรดนิวคลีอิก
4. เนื่องจากแอมพลิฟายเออร์ที่ต่างกันมีประสิทธิภาพการใช้งาน dUTP และความไวต่อ UNG ที่แตกต่างกัน ดังนั้นรีเอเจนต์จึงควรได้รับการปรับให้เหมาะสมหากความไวในการตรวจจับลดลงเมื่อใช้ระบบ UNGโปรดติดต่อเราเพื่อขอรับการสนับสนุนทางเทคนิคหากจำเป็น
5. เพื่อหลีกเลี่ยงการขยายผลิตภัณฑ์ PCR แบบยกยอดระหว่างปฏิกิริยาในขั้นตอนเดียว จึงจำเป็นต้องมีพื้นที่ทดลองและปิเปตโดยเฉพาะสำหรับการขยายทำงานโดยสวมถุงมือและเปลี่ยนบ่อยๆ และอย่าเปิดท่อปฏิกิริยาหลังการขยาย PCR
