Universal SYBR GREEN qPCR พรีมิกซ์ (สีน้ำเงิน)

หมายเลขแมว: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (แบบใช้สีย้อม) เป็นสารละลายเบื้องต้นสำหรับการขยาย PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์ 2 เท่า โดยมีคุณลักษณะเฉพาะด้วยความไวและความจำเพาะสูง มีสีฟ้า และมีผลกระทบจากการติดตามการเติมตัวอย่างส่วนประกอบหลัก Taq DNA polymerase ใช้แอนติบอดีสตาร์ทร้อนเพื่อยับยั้งการขยายสัญญาณแบบไม่เฉพาะเจาะจงอย่างมีประสิทธิภาพเนื่องจากการหลอมไพรเมอร์ระหว่างการเตรียมตัวอย่างในเวลาเดียวกัน สูตรจะเพิ่มปัจจัยส่งเสริมเพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการขยายของปฏิกิริยา PCR และปรับการขยายยีนให้เท่ากันด้วยเนื้อหา GC ที่แตกต่างกัน (30 ~ 70%) เพื่อให้ PCR เชิงปริมาณสามารถรับความสัมพันธ์เชิงเส้นที่ดีในเชิงปริมาณที่กว้าง ภูมิภาค.ผลิตภัณฑ์นี้มีสีย้อมอ้างอิงแบบพาสซีฟ ROX พิเศษ ซึ่งใช้ได้กับเครื่องมือ qPCR ส่วนใหญ่ไม่จำเป็นต้องปรับความเข้มข้นของ ROX บนเครื่องมือต่างๆจำเป็นต้องเพิ่มไพรเมอร์และเทมเพลตเท่านั้นเพื่อเตรียมระบบปฏิกิริยาสำหรับการขยายสัญญาณ

ส่วนประกอบ

ยูนิเวอร์แซลบลู qPCR มาสเตอร์มิกซ์

สภาพการเก็บรักษา

สินค้าจัดส่งพร้อมแพ็คน้ำแข็ง และสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -25°C~-15°C ได้นาน 18 เดือนจำเป็นต้องหลีกเลี่ยงการฉายรังสีแสงจ้าเมื่อจัดเก็บหรือเตรียมระบบปฏิกิริยา

ข้อมูลจำเพาะ

คำแนะนำ

1.ระบบปฏิกิริยา

[หมายเหตุ]: ผสมให้ละเอียดก่อนใช้งานเพื่อหลีกเลี่ยงการเกิดฟองมากเกินไปจากการเขย่าแรงๆ

ก) ความเข้มข้นของไพรเมอร์: ความเข้มข้นของไพรเมอร์ขั้นสุดท้ายคือ 0.2μmol/L และยังสามารถปรับได้ระหว่าง 0.1 ถึง 1.0μmol/L ตามความเหมาะสม

b) ความเข้มข้นของเทมเพลต: หากเทมเพลตเป็นสารละลายสต็อก cDNA ที่ไม่มีการเจือปน ปริมาตรที่ใช้ไม่ควรเกิน 1/10 ของปริมาตรรวมของปฏิกิริยา qPCR

c) การเจือจางเทมเพลต: แนะนำให้เจือจางสารละลายสต็อก cDNA 5-10 เท่าจำนวนเทมเพลตที่เพิ่มที่เหมาะสมที่สุดจะดีกว่าเมื่อค่า Ct ที่ได้จากการขยายคือ 20-30 รอบ

d) ระบบปฏิกิริยา: ขอแนะนำให้ใช้ 20μL หรือ 50μL เพื่อให้มั่นใจถึงประสิทธิภาพและความสามารถในการทำซ้ำของการขยายยีนเป้าหมาย

e) การเตรียมระบบ: โปรดจัดเตรียมในม้านั่งที่สะอาดเป็นพิเศษ และใช้ปลายและท่อปฏิกิริยาโดยไม่มีสารตกค้างของนิวคลีเอสขอแนะนำให้ใช้ปลายกับตลับกรองหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามและการปนเปื้อนของละอองลอย

2-โปรแกรมปฏิกิริยา

โปรแกรมมาตรฐาน

โปรแกรมด่วน

[หมายเหตุ]: โปรแกรมแบบเร็วเหมาะสำหรับยีนส่วนใหญ่ และสามารถลองใช้โปรแกรมมาตรฐานสำหรับยีนที่มีโครงสร้างรองที่ซับซ้อนแต่ละตัวได้

ก) อุณหภูมิและเวลาในการหลอม: โปรดปรับตามความยาวของไพรเมอร์และยีนเป้าหมาย

b) การได้รับสัญญาณเรืองแสง (★): โปรดตั้งค่าขั้นตอนการทดลองตามข้อกำหนดในคำแนะนำในการใช้เครื่องมือ

c) เส้นโค้งการหลอมเหลว: สามารถใช้โปรแกรมเริ่มต้นของเครื่องมือได้ตามปกติ

3. การวิเคราะห์ผลลัพธ์ 

จำเป็นต้องมีการจำลองทางชีวภาพอย่างน้อยสามครั้งสำหรับการทดลองเชิงปริมาณหลังจากเกิดปฏิกิริยา จะต้องยืนยันเส้นโค้งการขยายและเส้นโค้งการหลอมละลาย

3.1 เส้นโค้งการขยาย:

เส้นโค้งการขยายมาตรฐานคือรูปตัว Sการวิเคราะห์เชิงปริมาณจะแม่นยำที่สุดเมื่อค่า Ct อยู่ระหว่าง 20 ถึง 30 หากค่า Ct น้อยกว่า 10 จำเป็นต้องเจือจางเทมเพลตและทำการทดสอบอีกครั้งเมื่อค่า Ct อยู่ระหว่าง 30-35 จำเป็นต้องเพิ่มความเข้มข้นของเทมเพลตหรือปริมาตรของระบบปฏิกิริยา เพื่อปรับปรุงประสิทธิภาพการขยายสัญญาณ และรับประกันความแม่นยำของการวิเคราะห์ผลลัพธ์เมื่อค่า Ct มากกว่า 35 ผลการทดสอบจะไม่สามารถวิเคราะห์การแสดงออกของยีนในเชิงปริมาณได้ แต่สามารถนำมาใช้ในการวิเคราะห์เชิงคุณภาพได้

3.2 เส้นโค้งการหลอมละลาย:

จุดสูงสุดจุดเดียวของกราฟการหลอมเหลวบ่งชี้ว่าความจำเพาะของปฏิกิริยานั้นดีและสามารถดำเนินการวิเคราะห์เชิงปริมาณได้หากกราฟการหลอมเหลวแสดงพีคสองหรือหลายพีค การวิเคราะห์เชิงปริมาณจะไม่สามารถทำได้กราฟการหลอมเหลวแสดงพีคสองเท่า และจำเป็นต้องตัดสินว่าพีคที่ไม่ใช่เป้าหมายเป็นไพรเมอร์ไดเมอร์หรือการขยายแบบไม่เฉพาะเจาะจงโดย DNA agarose gel electrophoresisหากเป็นไพรเมอร์ไดเมอร์ แนะนำให้ลดความเข้มข้นของไพรเมอร์หรือออกแบบไพรเมอร์ใหม่ให้มีประสิทธิภาพในการขยายสัญญาณสูงหากเป็นการขยายแบบไม่เฉพาะเจาะจง โปรดเพิ่มอุณหภูมิการหลอม หรือออกแบบไพรเมอร์ใหม่โดยมีความเฉพาะเจาะจง

หมายเหตุ

โปรดสวมชุด PPE ที่จำเป็น เช่น เสื้อกาวน์และถุงมือดังกล่าว เพื่อสุขภาพและความปลอดภัยของคุณ！

ผลิตภัณฑ์นี้ใช้สำหรับการวิจัยเท่านั้น!