นาส เอ
Ribonuclease A (RNaseA) เป็นโพลีเปปไทด์สายเดี่ยวที่มีพันธะไดซัลไฟด์ 4 พันธะ โดยมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 13.7 kDaRNase A เป็นเอ็นโดริโบนิวคลีเอสที่ย่อยสลาย RNA แบบสายเดี่ยวโดยเฉพาะที่สารตกค้าง C และ Uโดยเฉพาะอย่างยิ่ง ความแตกแยกจะจดจำพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ที่เกิดจาก 5′-ไรโบสของนิวคลีโอไทด์และหมู่ฟอสเฟตบนไรโบส 3′ ของนิวคลีโอไทด์ไพริมิดีนที่อยู่ติดกัน ดังนั้นฟอสเฟต 2, 3′-ไซคลิกจะถูกไฮโดรไลซ์เป็น 3 ที่สอดคล้องกัน ′นิวคลีโอไซด์ฟอสเฟต (เช่น pG-pG-pC-pA-pG ถูกแยกโดย RNase A เพื่อสร้าง pG-pG-pCp และ A-PG)RNase A มีฤทธิ์มากที่สุดในการตัด RNA แบบเกลียวเดี่ยวความเข้มข้นในการทำงานที่แนะนำคือ 1-100μG/mL เข้ากันได้กับระบบปฏิกิริยาต่างๆความเข้มข้นของเกลือต่ำ (0-100 มิลลิโมลาร์ NaCl) สามารถใช้ในการตัด RNA แบบสายเดี่ยว, RNA แบบสายคู่ และสายโซ่ RNA ที่เกิดขึ้นจากการไฮบริไดเซชันของ RNA-DNAอย่างไรก็ตาม ที่ความเข้มข้นของเกลือสูง (≥0.3 M) RNase A จะแยก RNA แบบสายเดี่ยวโดยเฉพาะเท่านั้น
RNase A มักใช้เพื่อกำจัด RNA ในระหว่างการเตรียมพลาสมิด DNA หรือ DNA จีโนม ไม่ว่า DNase จะทำงานในระหว่างขั้นตอนการเตรียมการหรือไม่ก็ตามอาจส่งผลต่อปฏิกิริยาได้ง่ายวิธีการต้มแบบดั้งเดิมในอ่างน้ำสามารถใช้เพื่อปิดการทำงานของ DNase ได้ผลิตภัณฑ์นี้ไม่มี DNase และโปรตีเอส และไม่จำเป็นต้องให้ความร้อนก่อนใช้งานนอกจากนี้ ผลิตภัณฑ์นี้ยังสามารถใช้ในการทดลองทางอณูชีววิทยา เช่น การวิเคราะห์การป้องกัน RNase และการวิเคราะห์ลำดับ RNA
สภาพการเก็บรักษา
ผลิตภัณฑ์สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -25~-15°C มีอายุ 2 ปี
คำแนะนำ
นี่เป็นหนึ่งในวิธีการทั่วไปในการเตรียมโซลูชันการจัดเก็บข้อมูล RNase Aนอกจากนี้ยังสามารถเตรียมได้โดยวิธีการอื่นๆ ตามวิธีการดั้งเดิมในห้องปฏิบัติการหรือเอกสารอ้างอิง (เช่นละลายโดยตรงในสารละลาย Tris-HCl, pH 7.5 หรือ Tris-NaCl 10 มิลลิโมลาร์)
1. ใช้โซเดียมอะซิเตต 10 มิลลิโมลาร์ (pH 5.2) เพื่อเตรียมสารละลายสำหรับจัดเก็บ RNase A 10 มก./มล.
2. ทำความร้อนที่ 100 ℃ เป็นเวลา 15 นาที
3. ทำให้เย็นจนถึงอุณหภูมิห้อง เติม Tris-HCl 1 M ปริมาตร 1/10 (pH 7.4) ปรับ pH เป็น 7.4 (สำหรับเช่น เพิ่มโซลูชันการจัดเก็บ RNase 10 กรัม/มิลลิลิตร 500 มล. 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. บรรจุย่อยที่อุณหภูมิ -20°C สำหรับการจัดเก็บแบบแช่แข็ง ซึ่งสามารถคงตัวได้นานถึง 2 ปี
[หมายเหตุ]: เมื่อเดือดสารละลาย RNaseA ภายใต้สภาวะที่เป็นกลาง จะเกิดการตกตะกอนของ RNaseต้มที่อุณหภูมิ pH ต่ำกว่า และหากมีการตกตะกอนก็สามารถสังเกตได้ซึ่งอาจเกิดจากการมีโปรตีนเจือปนอยู่หากพบตะกอนหลังการต้ม สิ่งเจือปนสามารถกำจัดออกได้ด้วยการปั่นแยกด้วยความเร็วสูง (13,000 รอบต่อนาที) จากนั้นจึงบรรจุย่อยเพื่อจัดเก็บแบบแช่แข็ง
ข้อมูลผลิตภัณฑ์
| คำพ้องความหมาย | ไรโบนิวคลีเอส I;ไรโบนิวคลีเอสของตับอ่อน;ไรโบนิวคลีเอส 3'-ไพริมิดนูลิโกนิวคลีโอไทโดไฮโดรเลส;ราเนส เอ;เอนโดริโบนัลซีส I |
| หมายเลข CAS | 9001-99-4 |
| รูปร่าง | ผงไลโอฟิไลซ์สีขาว |
| น้ำหนักโมเลกุล | ~ 13.7kDa (ลำดับกรดอะมิโน) |
| ค่าพีเอช | 7.6 (ช่วงกิจกรรม 6-10) |
| อุณหภูมิที่เหมาะสม | 60°C (ช่วงกิจกรรม 15-70°C) |
| ตัวแทนการเปิดใช้งาน | Na2+-เค+ |
| สารยับยั้ง | สารยับยั้ง Rnase |
| วิธีการปิดการใช้งาน | ไม่สามารถปิดใช้งานได้ด้วยความร้อน แนะนำให้ใช้เครื่องหมุนเหวี่ยง |
| ต้นทาง | วัว |
| ความสามารถในการละลาย | ละลายได้ในน้ำ (10มก./มล.) |
| ขาดทุนเมื่อแห้ง | ≤5.0% |
| กิจกรรมของเอนไซม์ | ≥60 คูนิทซ์ หน่วย/มก |
| จุดไอโซอิเล็กทริก | 9.6 |
หมายเหตุ
เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ โปรดสวมเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งในการปฏิบัติงาน
