DNase I (ปราศจากไรเนส)(5u/ul)
หมายเลขแมว: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) เป็น endodeoxyribonuclease ที่สามารถย่อย DNA แบบเดี่ยวหรือแบบคู่ได้โดยจดจำและแยกพันธะฟอสโฟไดสเตอร์เพื่อผลิตโมโนดีออกซีนิวคลีโอไทด์หรือโอลิโกดีออกซีนิวคลีโอไทด์แบบเกลียวเดี่ยวหรือคู่ที่มีหมู่ฟอสเฟตที่ปลาย 5' และไฮดรอกซิลที่ปลาย 3'กิจกรรมของ DNase I ขึ้นอยู่กับ Ca2+และสามารถกระตุ้นได้ด้วยไอออนโลหะไดเวเลนต์ เช่น Mn2+และสังกะสี2+-5 มิลลิโมลาร์ แคลิฟอร์เนีย2+ปกป้องเอนไซม์จากการไฮโดรไลซิสต่อหน้ามก2+เอนไซม์สามารถสุ่มจดจำและแยกตำแหน่งใดๆ บนสายดีเอ็นเอใดก็ได้ต่อหน้ามน2+DNA สายคู่สามารถรับรู้และแยกออกได้พร้อมกันที่เกือบจะอยู่ในตำแหน่งเดียวกันเพื่อสร้างชิ้นส่วน DNA ปลายแบนหรือชิ้นส่วน DNA ปลายเหนียวที่มีนิวคลีโอไทด์ 1-2 ตัวยื่นออกมา
ส่วนประกอบ
| ชื่อ | 0.1KU | 1KU | 5 มก | 50 มก |
| DNase I ปราศจาก RNase | 20ไมโครลิตร | 200ไมโครลิตร | 1มล | 10 มล |
| 10×DNase I บัฟเฟอร์ | 1มล | 1มล | 5 × 1 มล | 5×10 มล |
สภาพการเก็บรักษา
-25 ℃ ~ -15 ℃ สำหรับการจัดเก็บ;ขนส่งภายใต้แพ็คน้ำแข็ง
คำแนะนำ
1. เตรียมสารละลายปฏิกิริยาในหลอดปลอด RNase ตามสัดส่วนที่แสดงด้านล่าง:
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ |
| อาร์เอ็นเอ | X ไมโครกรัม |
| 10 × DNase I บัฟเฟอร์ | 1ไมโครลิตร |
| DNase I ปราศจาก RNase(5U/μL) | 1 U ต่อ µg RNA① |
| ddH2O | สูงถึง 10μL |
หมายเหตุ: ①คำนวณปริมาตรของ DNase I ที่ต้องเติมตามปริมาณของ RNA
2. 37 ℃ เป็นเวลา 15 นาที;
3. เติม EDTA 0.5M ไปยังความเข้มข้นสุดท้ายที่ 2.5mM~5mM และให้ความร้อนที่ 65°C เป็นเวลา 10 นาทีเพื่อหยุดปฏิกิริยาตัวอย่างสามารถนำมาใช้โดยตรงสำหรับปฏิกิริยาถัดไป เช่น การถอดรหัสแบบย้อนกลับการทดลอง.
คำจำกัดความของหน่วย
หนึ่งหน่วยหมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่จะย่อยสลาย pBR322 1µg อย่างสมบูรณ์DNA ใน 10 นาทีที่ 37°C
ควบคุมคุณภาพ
อาร์เนส:5U ของ DNase I ที่มี MS2 RNA 1.6µg เป็นเวลา 4 ชั่วโมงที่ 37°C จะไม่เกิดการย่อยสลายเนื่องจากกำหนดโดย agarose gel electrophoresis
หมายเหตุ
1. กรุณาเตรียม 0.5MEDTA ด้วยตัวเอง
2. ใช้ 1U DNase I ต่อ µg ของ RNAอย่างไรก็ตาม หาก RNA น้อยกว่า 1µg โปรดใช้ 1U DNase I
3. กรุณาวางเอนไซม์บนน้ำแข็งระหว่างการทำงาน
