รูปภาพเด่น Superstart qPCR Premix plus-UNG HCB5071E

ซูเปอร์สตาร์ท qPCR พรีมิกซ์ บวก-UNG

หมายเลขแมว: HCB5071E

แพ็คเกจ: 100RXN/1000RXN/10000RXN

ไลโอฟิลไลซ์ได้

การปรับเปลี่ยนแอนติบอดี 95 ℃ เริ่มร้อน 1-5 นาที

ความไวและความจำเพาะสูง

การตรวจจับเสถียรที่ความเข้มข้นต่ำ ค่าเรืองแสงสูง

ส่งคำถาม

รายละเอียดสินค้า

รายละเอียดผลิตภัณฑ์

หมายเลขแมว: HCB5071E

Superstart qPCR Premix plus-UNG เป็นรีเอเจนต์เฉพาะทางที่ออกแบบมาสำหรับปฏิกิริยาเชิงปริมาณและคุณภาพ PCR แบบเรียลไทม์ โดยใช้การตรวจจับแบบใช้โพรบ ซึ่งพัฒนาขึ้นโดยเฉพาะสำหรับกระบวนการไลโอฟิไลเซชันประกอบด้วยเอนไซม์ Hotstart Taq plus (DG) ชนิดใหม่ ซึ่งมีการทำงานของเอนไซม์ Taq ปิดผนึกไว้ที่อุณหภูมิห้อง ยับยั้งการขยายขนาดที่ไม่เฉพาะเจาะจงอย่างมีประสิทธิภาพ ซึ่งเกิดจากการหลอมแบบไม่เฉพาะเจาะจงหรือการก่อตัวของไพรเมอร์ไดเมอร์ภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ จึงช่วยปรับปรุง ความจำเพาะของปฏิกิริยาการขยายรีเอเจนต์นี้ใช้บัฟเฟอร์เฉพาะ qPCR ที่ได้รับการปรับปรุงและระบบป้องกันการปนเปื้อน UNG/dUTP เพื่อให้เกิดการสตาร์ทที่ร้อนอย่างรวดเร็ว ซึ่งช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพและความไวของปฏิกิริยา qPCR ได้อย่างมากโดยสามารถได้เส้นโค้งมาตรฐานที่ดีในพื้นที่การวัดปริมาณที่หลากหลาย และดำเนินการวัดปริมาณได้อย่างแม่นยำ ป้องกันการขยายผลบวกลวงที่เกิดจากผลิตภัณฑ์ PCR ที่ตกค้างหรือการปนเปื้อนของละอองลอยได้อย่างมีประสิทธิภาพรีเอเจนต์นี้เข้ากันได้กับเครื่องมือ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงส่วนใหญ่จากผู้ผลิต เช่น Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad และ Roche เป็นต้น และแสดงความเสถียรที่ดีในรูปแบบไลโอฟิไลซ์

ก่อนหน้า: บีเอสไอ HCP1014A

ต่อไป: โปรตีเนส K (ของเหลว) HC4502A

องค์ประกอบของรีเอเจนต์

1. 5×HotstartPremix plus-UNG (มก²⁺ฟรี) (DG)

2. MgCl 250 มิลลิโมลาร์₂

3. 4×lyoprotectant (อุปกรณ์เสริม)

สภาพการเก็บรักษา

จัดเก็บข้อมูลระยะยาวที่ -20 ℃;สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C ได้นานถึง 3 เดือนผสมให้เข้ากันก่อนใช้และหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำ

โปรโตคอลการปั่นจักรยาน

ขั้นตอน	อุณหภูมิ	เวลา	วงจร
การย่อย	50 ℃	2 นาที	1
การเปิดใช้งานโพลีเมอเรส	95 ℃	1~5 นาที	1
การเสียสภาพ	95 ℃	10~20 วิ	40-50
การหลอมและการขยาย	56~64℃	20~60 วิ	40-50

ระบบปฏิกิริยาของเหลว qPCRการเตรียมลำต้น

องค์ประกอบ	ปริมาตร 25µL	ปริมาตร 50µL	ความเข้มข้นสุดท้าย
5×HotstartPremix บวก-UNG(มก²⁺ฟรี) (DG)	5ไมโครลิตร	10ไมโครลิตร	1×
MgCl 250mM₂	0.45ไมโครลิตร	0.9ไมโครลิตร	4.5 มม
4×ไลโอโพรเทคแทนท์¹	6.25ไมโครลิตร	12.5ไมโครลิตร	1×
25×ไพรเมอร์-โพรบผสม²	1ไมโครลิตร	2ไมโครลิตร	1×
แม่แบบดีเอ็นเอ³	-	-	-
ddH₂O	ถึง 25µL	ถึง 50µL	-

1. ความเข้มข้นสุดท้ายที่ 0.2μM สำหรับไพรเมอร์มักจะให้ผลลัพธ์ที่ดีเมื่อประสิทธิภาพของปฏิกิริยาไม่ดี ให้ปรับความเข้มข้นของไพรเมอร์ภายในช่วง 0.2-1μM ตามต้องการโดยทั่วไปความเข้มข้นของโพรบจะถูกปรับให้เหมาะสมภายในช่วง 0.1-0.3μM โดยการทดลองไล่ระดับเพื่อค้นหาค่าผสมที่เหมาะสมที่สุด

2. จำนวนสำเนาของยีนเป้าหมายที่อยู่ในเทมเพลตประเภทต่างๆ จะแตกต่างกันไปหากจำเป็น สามารถทำการเจือจางแบบไล่ระดับเพื่อกำหนดจำนวนการเพิ่มเทมเพลตที่เหมาะสมที่สุด

3. ระบบนี้สามารถไลโอฟิไลซ์ได้เมื่อลูกค้าใช้ระบบนี้โดยไม่มีข้อกำหนดในการทำแห้งแบบเยือกแข็ง สามารถเลือกเติมไลโอโพรเทคแทนต์ 4×ได้ หากจำเป็นต้องใช้ผลิตภัณฑ์แบบเยือกแข็งแห้ง ในระหว่างการตรวจสอบประสิทธิภาพของผลิตภัณฑ์ในขั้นตอนรีเอเจนต์ของเหลว ก็จะต้องเติมไลโอโพรเทคแทนต์ 4×เพื่อให้แน่ใจว่าสอดคล้องกับส่วนประกอบของระบบไลโอฟิไลซ์ และเอฟเฟกต์

เมื่อระบบถูกใช้งานd สำหรับการทำแห้งแบบเยือกแข็ง ให้เตรียม ระบบ as กำลังติดตาม:

องค์ประกอบ	25ไมโครลิตร ระบบปฏิกิริยา
5 ×HotstartPremix plus-UNG (มก²⁺ฟรี) (DG)	5ไมโครลิตร
MgCl 250mM₂	0.45ไมโครลิตร
4×ไลโอโพรเทคแทนท์	6.25ไมโครลิตร
25×ไพรเมอร์-โพรบผสม	1ไมโครลิตร
ddH₂O	ถึง 18~20µL

* หากจำเป็นต้องใช้ระบบอื่นสำหรับการทำแห้งแบบเยือกแข็ง โปรดปรึกษาแยกต่างหาก

กระบวนการไลโอฟิไลเซชันss

ขั้นตอน	อุณหภูมิ	เวลา	เงื่อนไข	ความดัน
การแช่แข็งล่วงหน้า	4 ℃	30 นาที	ถือ	1 ตู้เอทีเอ็ม
	-50 ℃	60 นาที	ระบายความร้อน
	-50 ℃	180 นาที	ถือ
การอบแห้งเบื้องต้น	-30 ℃	60 นาที	เครื่องทำความร้อน	สุดยอดสุญญากาศ
การอบแห้งเบื้องต้น	-30 ℃	70 นาที	ถือ	สุดยอดสุญญากาศ
การอบแห้งรอง	25 ℃	60 นาที	เครื่องทำความร้อน	สุดยอดสุญญากาศ
การอบแห้งรอง	25 ℃	300 นาที	ถือ	สุดยอดสุญญากาศ

1. กระบวนการไลโอฟิไลเซชันนี้เป็นกระบวนการทำแห้งเยือกแข็งในแหล่งกำเนิดสำหรับระบบปฏิกิริยา 25µLถ้าต้องใช้เม็ดบีดทำแห้งแบบเยือกแข็งหรือกระบวนการทำแห้งแบบเยือกแข็งในแหล่งกำเนิดอื่นๆ โปรดสอบถามแยกต่างหาก

2. กระบวนการไลโอฟิไลเซชันข้างต้นมีไว้เพื่อการอ้างอิงเท่านั้นประเภทผลิตภัณฑ์ที่แตกต่างกันและเครื่องทำแห้งแช่แข็งที่แตกต่างกันมีพารามิเตอร์ที่แตกต่างกัน ดังนั้นจึงสามารถปรับได้ตามความเป็นจริงเงื่อนไขระหว่างการใช้งาน

3. กระบวนการไลโอฟิไลเซชันที่แตกต่างกันอาจเหมาะสมกับขนาดของไลโอฟิไลซ์ที่แตกต่างกันผลิตภัณฑ์ ดังนั้นต้องมีการตรวจสอบการทดสอบที่เพียงพอเมื่อใช้กับการผลิตขนาดใหญ่

คำแนะนำการใช้ไลโอฟิไลซ์ผงแป้ง

1. ปั่นแยกผงไลโอฟิไลซ์เป็นเวลาสั้นๆ

2. เพิ่มเทมเพลตกรดนิวคลีอิกลงในผงไลโอฟิไลซ์และเติมน้ำได้มากถึง 25µL

3. ผสมให้เข้ากันโดยการหมุนเหวี่ยงแล้ววิ่งบนเครื่อง

ควบคุมคุณภาพ:

1. การทดสอบการทำงาน: ความไว ความจำเพาะ ความสามารถในการทำซ้ำของ qPCR

2. ไม่มีการทำงานของนิวคลีเอสจากภายนอก ไม่มีการปนเปื้อนเอนโด/เอ็กโซนิวคลีเอสจากภายนอก

ข้อมูลทางเทคนิค:

1. Superstart qPCR Premix plus-UNG ใช้เอนไซม์สตาร์ทร้อนแบบใหม่ที่ช่วยให้สตาร์ทร้อนได้อย่างรวดเร็วภายใน 1~5 นาทีด้วยสูตรบัฟเฟอร์พิเศษ จึงเหมาะสำหรับปฏิกิริยา PCR เชิงปริมาณฟลูออเรสเซนต์แบบมัลติเพล็กซ์

2. มีความจำเพาะสูงกว่าซึ่งช่วยเพิ่มความไวของการตรวจจับขีดจำกัด PCR เชิงปริมาณเรืองแสงได้อย่างมาก ทำให้เส้นโค้งการขยายเป็นมาตรฐาน ค่าเรืองแสงได้รับการปรับปรุงที่ชัดเจนที่เทมเพลตความเข้มข้นต่ำ เหมาะสำหรับรีเอเจนต์การตรวจจับ PCR เชิงปริมาณเรืองแสงความไวสูง

3. สำหรับไพรเมอร์ที่มีอุณหภูมิการหลอมต่ำกว่าหรือชิ้นส่วนยาวกว่า 200bp แนะนำให้ใช้วิธี 3 ขั้นตอน

4. ประสิทธิภาพการใช้ dUTP และความไวต่อเอนไซม์ UNG แตกต่างกันไปตามยีนเป้าหมายที่แตกต่างกัน ดังนั้น หากการใช้ระบบ UNG ส่งผลให้ความไวในการตรวจจับลดลง ควรปรับและเพิ่มประสิทธิภาพระบบปฏิกิริยาหากต้องการการสนับสนุนด้านเทคนิค โปรดติดต่อบริษัทของเรา

5. ใช้พื้นที่และปิเปตเฉพาะก่อนและหลังการขยาย สวมถุงมือระหว่างการทำงาน และเปลี่ยนบ่อยๆอย่าเปิดท่อปฏิกิริยาหลังจาก PCR เสร็จสิ้นเพื่อลดการปนเปื้อนของตัวอย่างจากผลิตภัณฑ์ PCR