พรีมิกซ์สีเขียว RT-qPCR SYBR ขั้นตอนเดียว
หมายเลขแมว: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix ใช้สำหรับการวัดปริมาณฟลูออเรสเซนต์โดยใช้สีย้อม SYBR Green Iการใช้ไพรเมอร์เฉพาะยีน การถอดรหัสแบบย้อนกลับและปฏิกิริยา qPCR เสร็จสมบูรณ์ในหลอดเดียว ขจัดความจำเป็นในการเปิดฝาและการปิเปตซ้ำๆ ปรับปรุงประสิทธิภาพการทดสอบอย่างมาก และลดความเสี่ยงของการปนเปื้อนสำหรับตัวอย่าง RNA ชุดอุปกรณ์นี้ใช้ Reverse Transcriptase ที่ทนความร้อนเพื่อการสังเคราะห์ cDNA ที่มีประสิทธิภาพ และใช้ HotStart Taq DNA Polymerase สำหรับการขยายเชิงปริมาณภายใต้ระบบบัฟเฟอร์ที่ได้รับการปรับปรุงให้เหมาะสม ความไวของชุดอุปกรณ์สามารถสูงถึง 0.1 pg สำหรับเป้าหมายที่มีการแสดงออกอย่างมาก และสูงถึง 1 pg สำหรับเป้าหมายที่มีการแสดงออกปานกลางชุดนี้เหมาะสำหรับการขยายและการหาปริมาณตัวอย่าง DNAช่วยให้การตรวจจับและการหาปริมาณกรดนิวคลีอิกจากตัวอย่างพืชและสัตว์ เซลล์ และจุลินทรีย์ต่างๆ เป็นไปอย่างละเอียดอ่อน
ส่วนประกอบ
| No | ชื่อ | ปริมาณ | ปริมาณ |
| 1 | บัฟเฟอร์ขั้นสูง | 250 ไมโครลิตร | 2×1.25 มล |
| 2 | ผสมเอนไซม์ขั้นสูง | 20 ไมโครลิตร | 200 ไมโครลิตร |
| 3 | RNase ฟรี H2O | 250 ไมโครลิตร | 2×1.25 มล |
สภาพการเก็บรักษา
ผลิตภัณฑ์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -25~-15℃ ให้ห่างจากแสงเป็นเวลา 1 ปี
คำแนะนำ
1.การกำหนดค่าระบบปฏิกิริยาd
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ (ไมโครลิตร) | ปริมาณ (ไมโครลิตร) | ความเข้มข้นสุดท้าย |
| บัฟเฟอร์ขั้นสูง | 12.5 | 25 | 1× |
| ผสมเอนไซม์ขั้นสูง | 1 | 2 | - |
| ฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (10 ไมโครโมล/ลิตร)a | 0.5 | 1 | 0.2 ไมโครโมล/ลิตร |
| รีเวิร์สไพรเมอร์ (10 ไมโครโมล/ลิตร)a | 0.5 | 1 | 0.2 ไมโครโมล/ลิตร |
| RNA แทมเพลตb | X | X | - |
| RNase ฟรี H2โอc | ถึง 25 | ถึง 50 | - |
หมายเหตุ:
1) ก.ตความเข้มข้นของไพรเมอร์สุดท้ายคือ 0.2 ไมโครโมล/ลิตร ซึ่งสามารถปรับได้ระหว่าง 0.1 ถึง 1 ไมโครโมล/ลิตร ตามความเหมาะสม
2)ข.รีเอเจนต์มีความไวอย่างยิ่ง โดย Total RNA ในช่วง 1pg-1μg และการทดสอบตัวอย่างของมนุษย์แสดงอินพุตที่เหมาะสมที่สุดที่ 1 pg-100 ng ซึ่งควบคุมค่า Ct ทั้งหมดในช่วง 15-30 ตามความเหมาะสม
3) ค.ขอแนะนำให้ใช้ 20μL หรือ 50μL เพื่อรับรองความถูกต้องและความสามารถในการทำซ้ำของการขยายยีนเป้าหมาย
4) ง.โปรดเตรียมตัวในม้านั่งที่สะอาดเป็นพิเศษ และใช้ทิปและท่อปฏิกิริยาที่ปราศจากสารตกค้างของนิวคลีเอสแนะนำให้ใช้ทิปพร้อมตลับกรองหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามและการปนเปื้อนของละอองลอย
2.โปรแกรมปฏิกิริยา
| ขั้นตอนวงจร | อุณหภูมิ | เวลา | รอบ |
| การถอดเสียงแบบย้อนกลับ | 50 ℃a | 6 นาที | 1 |
| การเสียสภาพเบื้องต้น | 95 ℃ | 5 นาที | 1 |
| ปฏิกิริยาการขยาย | 95 ℃ | 15 วินาที | 40 |
| 60 ℃b | 30 วินาที | ||
| ระยะเส้นโค้งหลอมละลาย | ค่าเริ่มต้นของเครื่องมือ | 1 | |
หมายเหตุ:
1) ก.อุณหภูมิการถอดรหัสแบบย้อนกลับสามารถเลือกได้ระหว่าง 50-55°C ตามความต้องการในการทดลองสำหรับตัวอย่าง DNA สามารถละเว้นกระบวนการถอดรหัสแบบย้อนกลับได้
2)ข.ในกรณีพิเศษ สามารถปรับอุณหภูมิการหลอม/การยืดได้ตามค่าไพรเมอร์ Tm แนะนำให้ใช้ 60°C
หมายเหตุ
1. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้สำหรับการวิจัยเท่านั้น
2. กรุณาใช้งานด้วยเสื้อกาวน์แล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง เพื่อความปลอดภัยของคุณ
