สารยับยั้ง Rnase
สารยับยั้ง Murine RNase เป็นตัวยับยั้ง RNase ของ murine ชนิดรีคอมบิแนนท์ที่แสดงออกและทำให้บริสุทธิ์จาก E.coliโดยจับกับ RNase A, B หรือ C ในอัตราส่วน 1:1 ผ่านพันธะที่ไม่ใช่โควาเลนต์ จึงยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ทั้งสามและปกป้อง RNA จากการย่อยสลายอย่างไรก็ตาม ไม่มีผลกับ RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H หรือ RNase จาก Aspergillusสารยับยั้ง Murine RNase ได้รับการทดสอบโดย RT-PCR, RT-qPCR และ IVT mRNA และเข้ากันได้กับ Reverse transcriptases เชิงพาณิชย์ DNA polymerases และ RNA polymerases
เมื่อเปรียบเทียบกับสารยับยั้ง RNase ของมนุษย์ สารยับยั้ง RNase ของ murine ไม่มีซีสเตอีนสองตัวที่มีความไวสูงต่อการเกิดออกซิเดชัน ซึ่งทำให้สารยับยั้งหยุดทำงานทำให้มีความคงตัวที่ความเข้มข้น DTT ต่ำ (น้อยกว่า 1 mM)คุณลักษณะนี้ทำให้เหมาะสำหรับใช้ในปฏิกิริยาที่ DTT ที่มีความเข้มข้นสูงส่งผลเสียต่อปฏิกิริยา (เช่น RT-PCR แบบเรียลไทม์)
Aใบสมัคร
ผลิตภัณฑ์นี้สามารถนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการทดลองใดๆ ก็ตามที่อาจเกิดการรบกวนของ RNase ได้เพื่อหลีกเลี่ยงการเสื่อมสลายของ RNA เช่น:
1.การสังเคราะห์สายแรกของ cDNA, RT-PCR, RT-qPCR ฯลฯ
2.ปกป้อง RNA จากการย่อยสลายในระหว่างการถอดรหัส/การแปลภายนอกร่างกาย (เช่น ระบบการจำลองแบบไวรัสในหลอดทดลอง)
3.การยับยั้งกิจกรรม RNase ระหว่างการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของ RNA
สภาพการเก็บรักษา
ผลิตภัณฑ์สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -25~- 15 ℃ มีอายุ 2 ปี
บัฟเฟอร์การจัดเก็บข้อมูล
KCl 50 มิลลิโมลาร์, HEPES-KOH 20 มิลลิโมลาร์ (pH 7.6, 25 ℃), 8 มิลลิโมลาร์ DTT และกลีเซอรอล 50%
คำจำกัดความของหน่วย
ปริมาณของสารยับยั้ง RNase ของหนูที่จำเป็นในการยับยั้งการทำงานของ 5ng ของไรโบนิวคลีเอส A 50% ถูกกำหนดให้เป็นหนึ่งหน่วย (U)
น้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน
น้ำหนักโมเลกุลของสารยับยั้ง RNase ของ murine คือ 50 kDa
ควบคุมคุณภาพ
เอ็กโซนิวคลีเอส กิจกรรม:
สารยับยั้ง RNase ของหนู 40 U ที่มี 1 μg แล -Hind III ย่อย DNA ที่ 37 ℃ เป็นเวลา 16 ชั่วโมง ไม่มีการย่อยสลายตามที่กำหนดโดย agarose gel electrophoresis
กิจกรรมเอนโดนิวคลีเอส:
สารยับยั้ง RNase ของหนู 40 U ที่มี DNA 1μ g lam ที่ 37 ℃ เป็นเวลา 16 ชั่วโมงจะไม่เกิดการย่อยสลายตามที่กำหนดโดย agarose gel electrophoresis
นิค กิจกรรม:
40U ของตัวยับยั้ง RNase ของหนูที่มี 1μ g pBR322 ที่ 37°C เป็นเวลา 16 ชั่วโมงจะไม่เกิดการสลายตามที่กำหนดโดย agarose gel electrophoresis
อาร์เนส กิจกรรม:
40U ของตัวยับยั้ง RNase ของหนูที่มี MS2 RNA 1.6μ g เป็นเวลา 4 ชั่วโมงที่ 37 ℃ ทำให้ไม่มีการย่อยสลายตามที่กำหนดโดย agarose gel electrophoresis
E.โคไลดีเอ็นเอ:
ตัวยับยั้ง RNase ของหนู 40 U ได้รับการคัดกรองสำหรับการมีอยู่ของ DNA จีโนมของ E. coli โดยใช้ TaqMan qPCR พร้อมด้วยไพรเมอร์เฉพาะสำหรับตำแหน่ง E. coli 16S rRNAการปนเปื้อนของดีเอ็นเอของจีโนมของ E. coli คือ ≤ 0.1 pg/40 U
Nโอเต้s
1.การสั่นหรือการกวนอย่างรุนแรงจะนำไปสู่การหยุดการทำงานของเอนไซม์
2. ช่วงอุณหภูมิที่เหมาะสมของตัวยับยั้งนี้คือ 25-55 ℃ และถูกปิดใช้งานที่อุณหภูมิ 65 ℃ขึ้นไป
3. กิจกรรมของ RNase H, RNase 1 และ RNase T1 ไม่ได้ถูกยับยั้งโดยสารยับยั้ง RNase ของ murine
4. การยับยั้งการทำงานของ RNase พบในช่วง pH กว้าง (pH 5-9 มีฤทธิ์ทั้งหมด) และกิจกรรมสูงสุดพบที่ pH 7-8
5.เนื่องจากโดยทั่วไปแล้วไรโบนิวคลีเอสจะยังคงออกฤทธิ์ภายใต้สภาวะการเสื่อมสภาพ จึงต้องระมัดระวังเพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้โมเลกุลของสารยับยั้ง RNase ถูกทำลายซึ่งไปซับซ้อนกับไรโบนิวคลีเอสเพื่อป้องกันการปล่อยไรโบนิวคลีเอสที่ออกฤทธิ์ ควรหลีกเลี่ยงอุณหภูมิที่สูงกว่า 50 °C และมีความเข้มข้นสูงของยูเรียหรือสารทำลายสภาพอื่น ๆ
