ไวต่ออุณหภูมิ UNG
ไวต่ออุณหภูมิ UNG (TS-UNG) ได้มาจากการแสดงออกของรีคอมบิแนนท์ใน E. coliเอนไซม์กระตุ้นการปล่อย uracil อิสระจาก DNA สายเดี่ยวและสายคู่ที่ประกอบด้วย uracil และไม่ทำงานกับ RNAเมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์ UNG ทั่วไปที่มีต้นกำเนิดจากยีน E. coli เอนไซม์ TS-UNG มีฤทธิ์สูงกว่าที่อุณหภูมิต่ำ (20°C~37°C) และมีความไวต่ออุณหภูมิและหยุดทำงานได้ง่าย (50°C) โดยหลีกเลี่ยงการเสื่อมสภาพของการขยายสัญญาณที่มี dUTP ผลิตภัณฑ์ที่อุณหภูมิห้องโดยกิจกรรมตกค้างที่อาจยังคงอยู่หลังจากการหยุดการทำงานของเอนไซม์ UNG แบบเดิมดังนั้น เอนไซม์ TS-UNG ไม่เพียงเหมาะสำหรับปฏิกิริยาป้องกันการปนเปื้อนของ PCR เท่านั้น แต่ยังเข้ากันได้ดีกับโปรแกรมขยาย RT-PCR และสามารถนำมาใช้ในปฏิกิริยาป้องกันการปนเปื้อนของ RT-PCR ได้อีกด้วย
แอปพลิเคชั่นที่แนะนำ
การขยายการป้องกันการปนเปื้อน
สภาพการเก็บรักษา
-20°C สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ควรผสมให้เข้ากันก่อนใช้งาน หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายบ่อยๆ
บัฟเฟอร์การจัดเก็บข้อมูล
ทริส-HCl 20 มิลลิโมลาร์ (pH 7.5) , NaCl 100 มิลลิโมลาร์, EDTA 0.1 มิลลิโมลาร์, DTT 1 มิลลิโมลาร์, สารทำให้คงตัว, กลีเซอรอล 50%
คำจำกัดความของหน่วย
ปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการย่อยสลาย 1µg ของ DNA สายเดี่ยวที่มีเบส dU ใน 1 ชั่วโมงที่ 37°C คือ 1 หน่วยของกิจกรรม (U)
ควบคุมคุณภาพ
1.SDS-PAGE ความบริสุทธิ์ของอิเล็กโตรโฟเรติกมากกว่า 98%
2.กิจกรรมการย่อยสลาย การควบคุมแบบแบทช์ต่อแบทช์ ความเสถียร
3.ไม่มีกิจกรรมของนิวคลีเอสจากภายนอก ไม่มีการปนเปื้อนของเอนโดนิวคลีเอสหรือเอ็กโซนิวคลีเอสจากภายนอก
คำแนะนำ
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ (ไมโครลิตร) | ความเข้มข้นสุดท้าย |
| บัฟเฟอร์ PCR 10 × (ไม่มี dNTP, Mg²+ฟรี) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 ไมโครโมลาร์ |
| dUTP (แทนที่ dTTP) | - | 200-600 ไมโครโมลาร์ |
| MgCl 25 มิลลิโมลาร์2 | 2-8 ไมโครลิตร | 1-4 มม |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 น |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 ยู (0.1-0.5U) |
| 25 × ไพรเมอร์ผสมก | 2 | 1× |
| แม่แบบ | - | <1ไมโครกรัม/ปฏิกิริยา |
| ddH₂O | ถึง 50 | - |
หมายเหตุ: ก: หากใช้สำหรับ qPCR/qRT-PCR ควรเพิ่มหัววัดฟลูออเรสเซนต์เข้าไปในระบบปฏิกิริยาโดยปกติแล้วความเข้มข้นของไพรเมอร์ขั้นสุดท้ายที่ 0.2 μM จะให้ผลลัพธ์ที่ดีเมื่อประสิทธิภาพของปฏิกิริยาไม่ดี ความเข้มข้นของไพรเมอร์สามารถปรับได้ในช่วง 0.2-1 μMโดยปกติแล้ว ความเข้มข้นของโพรบจะถูกปรับให้เหมาะสมในช่วง 0.1-0.3 μMการทดลองไล่ระดับความเข้มข้นสามารถทำได้เพื่อค้นหาส่วนผสมที่ดีที่สุดของไพรเมอร์และโพรบ
หมายเหตุ
1.อุณหภูมิปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุดของเอนไซม์ TS-UNG ค่อนข้างต่ำ และสามารถปรับให้เหมาะสมในช่วง 20°C~37°C ปริมาณของเอนไซม์และเวลาปฏิกิริยาสามารถปรับให้เหมาะสมในช่วง 0.1~0.5 U, 5~ 10 นาที;และเอนไซม์สามารถถูกปิดใช้งานได้ในกระบวนการถอดรหัสแบบย้อนกลับ
2.เหมาะสำหรับ PCR และ RT-PCR เพื่อป้องกันการปนเปื้อน
3.หลีกเลี่ยงการแช่แข็งละลายบ่อยๆ และอย่าให้อุณหภูมิมีความผันผวนอย่างมาก
4.ยีนต่างๆ ที่จะขยายจะมีประสิทธิภาพการใช้งาน dUTP และความไวต่อเอนไซม์ UNG ที่แตกต่างกัน ดังนั้น หากการใช้ระบบ UNG ส่งผลให้ความไวในการตรวจจับลดลง ควรปรับและเพิ่มประสิทธิภาพระบบปฏิกิริยา หากคุณต้องการการสนับสนุนทางเทคนิค โปรดติดต่อ บริษัท ของเรา.
