ยูราซิล ดีเอ็นเอ ไกลโคซิเลส
Uracil-DNA Glycosylase (UNG หรือ UDG) เป็นโคลนลูกผสมของ E.coli ที่มีน้ำหนักโมเลกุล 25 kDaโดยจะกระตุ้นการปล่อยยูราซิลอิสระจาก DNA แบบเกลียวเดี่ยวและเกลียวคู่ที่ประกอบด้วย uracil และไม่มีฤทธิ์ต่อต้าน RNA และสามารถใช้เพื่อป้องกันการปนเปื้อนของผลิตภัณฑ์ขยายสัญญาณ PCRหลักการของการกระทำนั้นขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่าหาก dUTP ถูกแทนที่ด้วย dTTP ในปฏิกิริยา PCR และผลิตภัณฑ์ขยายสัญญาณ PCR ที่มีฐาน dU เกิดขึ้น เอนไซม์จะสามารถเลือกทำลายพันธะไกลโคซิดิกของฐาน U แบบเกลียวเดี่ยวและเกลียวคู่ได้ DNA และลดคุณภาพผลิตภัณฑ์ขยาย PCR
แอปพลิเคชั่นที่แนะนำ
การขยายการป้องกันการปนเปื้อน
สภาพการเก็บรักษา
-20°C สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ควรผสมให้เข้ากันก่อนใช้งาน หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายบ่อยๆ
บัฟเฟอร์การจัดเก็บข้อมูล
Tris-HCl 20 มิลลิโมลาร์ (pH 8.0) , NaCl 150 มิลลิโมลาร์, EDTA 1 มิลลิโมลาร์, DTT 1 มิลลิโมลาร์, สารทำให้คงตัว, กลีเซอรอล 50%
คำจำกัดความของหน่วย
ปริมาณของเอนไซม์ที่ต้องใช้ในการย่อยสลาย 1µg ของ DNA สายเดี่ยวที่มีเบส dU ใน 1 ชั่วโมงที่ 37°C คือ 1 หน่วย
ควบคุมคุณภาพ
1.SDS-PAGE ความบริสุทธิ์ของอิเล็กโตรโฟเรติกมากกว่า 98%
2.ความไวในการขยาย การควบคุมแบบแบตช์ต่อแบตช์ ความเสถียร
3.หลังจากที่ 1U ของ UNG ได้รับการบำบัดที่อุณหภูมิ 50°C เป็นเวลา 2 นาที เทมเพลตที่มี U ต่ำกว่า 103 สำเนาควรจะถูกลดระดับลงโดยสิ้นเชิง และไม่สามารถผลิตผลิตภัณฑ์ขยายสัญญาณได้
4.ไม่มีกิจกรรมของนิวคลีเอสจากภายนอก
คำแนะนำ
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ (ไมโครลิตร) | ความเข้มข้นสุดท้าย |
| บัฟเฟอร์ PCR 10 × (ไม่มี dNTP, Mg²+ฟรี) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 ไมโครโมลาร์ |
| dUTP (แทนที่ dTTP) | - | 200-600 ไมโครโมลาร์ |
| MgCl 25 มิลลิโมลาร์2 | 2-8 ไมโครลิตร | 1-4 มม |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 น |
| 5 U/μL อุง | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 ยู (0.1-0.5) |
| 25 × ไพรเมอร์ผสมก | 2 | 1× |
| แม่แบบ | - | <1ไมโครกรัม/ปฏิกิริยา |
| ddH₂O | ถึง 50 | - |
บันทึก: ตอบ: หากใช้สำหรับ qPCR/qRT-PCR ควรเพิ่มหัววัดฟลูออเรสเซนต์เข้าไปในระบบปฏิกิริยาโดยปกติแล้วความเข้มข้นของไพรเมอร์ขั้นสุดท้ายที่ 0.2 μM จะให้ผลลัพธ์ที่ดีเมื่อประสิทธิภาพของปฏิกิริยาไม่ดี ความเข้มข้นของไพรเมอร์สามารถปรับได้ในช่วง 0.2-1 μMโดยปกติแล้ว ความเข้มข้นของโพรบจะถูกปรับให้เหมาะสมในช่วง 0.1-0.3 μMการทดลองไล่ระดับความเข้มข้นสามารถทำได้เพื่อค้นหาส่วนผสมที่ดีที่สุดของไพรเมอร์และโพรบ
หมายเหตุ
1.เอนไซม์ UNG สามารถใช้เพื่อกำจัดผลิตภัณฑ์ขยายสัญญาณ dUTP ที่ปนเปื้อนออกจากระบบปฏิกิริยาก่อนปฏิกิริยาขยาย PCR จากนั้นเพื่อหลีกเลี่ยงผลลัพธ์ที่เป็นบวกลวงเนื่องจากการปนเปื้อนของผลิตภัณฑ์
2.อุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับเอนไซม์ UNG ที่จะใช้ในปฏิกิริยา PCR ป้องกันการปนเปื้อนโดยทั่วไปคือ 50 ℃ เป็นเวลา 2 นาทีสภาวะการปิดใช้งานคือ 95 ℃เป็นเวลา 5 นาที
3.หลีกเลี่ยงการแช่แข็งละลายบ่อยๆ และอย่าให้อุณหภูมิมีความผันผวนอย่างมาก
4.ยีนต่างๆ ที่จะขยายจะมีประสิทธิภาพการใช้งาน dUTP และความไวต่อเอนไซม์ UNG ที่แตกต่างกัน ดังนั้น หากการใช้ระบบ UNG ส่งผลให้ความไวในการตรวจจับลดลง ควรปรับและเพิ่มประสิทธิภาพระบบปฏิกิริยา หากคุณต้องการการสนับสนุนทางเทคนิค โปรดติดต่อ บริษัท ของเรา.
