นาส เอ
Ribonuclease A(RNaseA) เป็นโพลีเปปไทด์สายเดี่ยวที่มีพันธะไดซัลไฟด์ 4 พันธะ โดยมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 13.7 kDaRNase A เป็นเอนโดริโบนิวคลีเอสที่ย่อยสลาย RNA แบบสายเดี่ยวโดยเฉพาะที่สารตกค้าง C และ Uโดยเฉพาะอย่างยิ่ง ความแตกแยกจะจดจำพันธะฟอสโฟไดสเตอร์ที่เกิดจากไรโบส 5' ของนิวคลีโอไทด์และหมู่ฟอสเฟตบนไรโบส 3' ของนิวคลีโอไทด์ไพริมิดีนที่อยู่ติดกัน ดังนั้นฟอสเฟต 2,3'-ไซคลิกจะถูกไฮโดรไลซ์เป็น 3 ที่สอดคล้องกัน 'นิวคลีโอไซด์ฟอสเฟต (เช่น pG-pG-pC-pA-pG ถูกแยกออกโดย RNase A เพื่อสร้าง pG-pG-pCp และ A-PG)RNase A มีฤทธิ์มากที่สุดในการตัด RNA แบบเกลียวเดี่ยวความเข้มข้นในการทำงานที่แนะนำคือ 1- 100 μ G/mL เข้ากันได้กับระบบปฏิกิริยาต่างๆความเข้มข้นของเกลือต่ำ (0-100 มิลลิโมลาร์ NaCl) สามารถใช้ในการตัด RNA แบบสายเดี่ยว, RNA แบบสายคู่ และสายโซ่ RNA ที่เกิดขึ้นจากการไฮบริไดเซชันของ RNA-DNA
อย่างไรก็ตาม ที่ความเข้มข้นของเกลือสูง (≥0.3 M) RNase A จะแยก RNA แบบสายเดี่ยวโดยเฉพาะเท่านั้น
RNase A มักใช้เพื่อกำจัด RNA ในระหว่างการเตรียมพลาสมิด DNA หรือ DNA ของจีโนมไม่ว่า DNase จะทำงานในระหว่างขั้นตอนการเตรียมการหรือไม่ก็ตามอาจส่งผลต่อปฏิกิริยาได้ง่ายวิธีการต้มแบบดั้งเดิมในอ่างน้ำสามารถใช้เพื่อปิดการทำงานของ DNase ได้ผลิตภัณฑ์นี้ไม่มี DNase และโปรตีเอส และไม่จำเป็นต้องให้ความร้อนก่อนใช้งานนอกจากนี้ ผลิตภัณฑ์นี้ยังสามารถใช้ในการทดลองทางอณูชีววิทยา เช่น การวิเคราะห์การป้องกัน RNase และการวิเคราะห์ลำดับ RNA
สภาพการเก็บรักษา
ควรเก็บผลิตภัณฑ์ไว้ที่อุณหภูมิ -25°C~- 15°C เป็นเวลา 2 ปี
ข้อมูลจำเพาะ
| รูปร่าง | ผง |
| ปริมาณ | 100มก. / 1ก |
| ประเภทสินค้า | อาร์เนส เอ |
คำแนะนำ
นี่เป็นหนึ่งในวิธีการทั่วไปในการเตรียมโซลูชันการจัดเก็บข้อมูล RNase Aนอกจากนี้ยังสามารถเตรียมได้โดยวิธีการอื่นตามวิธีการดั้งเดิมในห้องปฏิบัติการหรือเอกสารอ้างอิง (เช่นละลายโดยตรงในสารละลาย Tris-HCl, pH 7.5 หรือ Tris-NaCl 10 มิลลิโมลาร์)
1. ใช้โซเดียมอะซิเตต 10 มิลลิโมลาร์ (pH 5.2) เพื่อเตรียมสารละลายสำหรับจัดเก็บ RNase A 10 มก./มล.
2. ทำความร้อนที่ 100 ℃ เป็นเวลา 15 นาที
3. ทำให้เย็นจนถึงอุณหภูมิห้อง เติม Tris-HCl 1 M ปริมาตร 1/10 (pH 7.4) ปรับ pH เป็น 7.4 (สำหรับตัวอย่างเช่น เติมสารละลายจัดเก็บ RNase 10 มก./มล. 1 M Tris-HCl, pH7.4 500 มล.)
4. บรรจุย่อยที่อุณหภูมิ -20 ℃ สำหรับการจัดเก็บแช่แข็ง ซึ่งสามารถคงตัวได้นานถึง 2 ปี
[หมายเหตุ]:
เมื่อต้มสารละลาย RNaseA ภายใต้สภาวะที่เป็นกลาง จะเกิดการตกตะกอนของ RNaseต้มที่อุณหภูมิ pH ต่ำกว่า และหากมีการตกตะกอนก็สามารถสังเกตได้ซึ่งอาจเกิดจากการมีโปรตีนเจือปนอยู่หากพบตะกอนหลังจากการเดือด สามารถกำจัดสิ่งเจือปนออกได้ด้วยการปั่นแยกด้วยความเร็วสูง (13,000 รอบต่อนาที) จากนั้นจึงบรรจุย่อยเพื่อจัดเก็บแบบแช่แข็ง
หมายเหตุ
โปรดสวมชุด PPE ที่จำเป็น เสื้อกาวน์และถุงมือดังกล่าว เพื่อสุขภาพและความปลอดภัยของคุณ
