ไวลด์แท็ค DNA โพลีเมอเรส
Taq DNA Polymerase เป็น DNA polymerase ที่ทนความร้อนได้จาก Thermus Aquaticus YT-1 ซึ่งมีฤทธิ์ของโพลีเมอเรส 5′→3′ และกิจกรรม endonuclease แบบพนัง 5′
ส่วนประกอบ
| ส่วนประกอบ | HC1,010เอ-01 | HC1,010เอ-02 | HC1,010เอ-03 | HC1,010เอ-04 |
| 10× บัฟเฟอร์แทค | 2×1 มล | 2×10 มล | 2×50 มล | 5×200 มล |
| Taq DNA โพลีเมอเรส (5 U/μL) | 0.1 มล | 1 มล | 5 มล | 5×10 มล |
สภาพการเก็บรักษา
การขนส่งภายใต้อุณหภูมิ 0°C และเก็บไว้ที่ -25°C~-15°C
คำจำกัดความของหน่วย
หนึ่งหน่วยหมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่รวม dNTP 15 nmol ลงในวัสดุที่ไม่ละลายกรดในเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 75°C
ควบคุมคุณภาพ
1.การทดสอบความบริสุทธิ์ของโปรตีน (SDS-PAGE)-ความบริสุทธิ์ของ Taq DNA polymerase ถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ SDS-PAGE ≥95%
2.Endกิจกรรมโอนิวคลีส:ขั้นต่ำ 5 U ของ Taq DNA polymerase ที่มี 1 μg lamDNA เป็นเวลา 16 ชั่วโมงที่ 37 ℃ ส่งผลให้ไม่มีการย่อยสลายที่ตรวจพบได้ตามที่กำหนด
3.กิจกรรมเอ็กโซนิวคลีเอส:อย่างน้อย 5 U ของ Taq DNA polymerase ที่มี 1 μg λ -Hind Ⅲ ย่อย DNA เป็นเวลา 16 ชั่วโมงที่ 37 ℃ ส่งผลให้ไม่มีการย่อยสลายที่ตรวจพบได้ตามที่กำหนด
4.กิจกรรมของนิเคส:อย่างน้อย 5 U ของ Taq DNA polymerase พร้อมด้วย 1 μg pBR322 DNA เป็นเวลา 16 ชั่วโมงที่ 37°C ส่งผลให้ไม่มีการย่อยสลายที่ตรวจพบได้ตามที่กำหนด
5.กิจกรรมอาร์เนส:Taq DNA polymerase ขั้นต่ำ 5 U ที่มี MS2 RNA 1.6 μg เป็นเวลา 16 ชั่วโมงที่ 37°C ส่งผลให้ไม่มีการย่อยสลายที่ตรวจพบได้ตามที่กำหนด
6.อี. โคไลดีเอ็นเอ:5 U ของ Taq DNA polymerase ได้รับการคัดกรองว่ามี DNA จีโนมของ E. coli โดยใช้ TaqMan qPCR พร้อมไพรเมอร์เฉพาะสำหรับ E. coli 16S rRNA locusการปนเปื้อน DNA ของจีโนมของ E. coli อยู่ที่ ≤1 สำเนา
7.การขยาย PCR (5.0 kb Lambda DNA)- ปฏิกิริยา 50 µL ที่ประกอบด้วย DNA Lambda 5 ng พร้อมด้วย Taq DNA Polymerase 5 ยูนิตสำหรับการขยาย PCR 25 รอบส่งผลให้ได้ผลิตภัณฑ์ 5.0 kb ที่คาดหวัง
การตั้งค่าปฏิกิริยา
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ |
| แม่แบบดีเอ็นเอa | ไม่จำเป็น |
| ไพรเมอร์ฟอร์เวิร์ด 10 μM | 1 ไมโครลิตร |
| ไพรเมอร์ย้อนกลับ 10 μM | 1 ไมโครลิตร |
| dNTP มิกซ์ (แต่ละอัน 10mM) | 1 ไมโครลิตร |
| บัฟเฟอร์แทค 10× | 5 ไมโครลิตร |
| แทค ดีเอ็นเอ โพลีเมอเรสข | 0.25 ไมโครลิตร |
| น้ำที่ปราศจากนิวเคลียร์ | มากถึง 50 ไมโครลิตร |
หมายเหตุ:
1) ความเข้มข้นของปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุดของเทมเพลตที่แตกต่างกันจะแตกต่างกันตารางต่อไปนี้แสดงการใช้เทมเพลตที่แนะนำของระบบปฏิกิริยา 50 µL
| ดีเอ็นเอ | จำนวน |
| จีโนม | 1 นาโนกรัม-1 ไมโครกรัม |
| พลาสมิดหรือไวรัส | 1 pg-1 ง |
2) ความเข้มข้นที่เหมาะสมที่สุดของ Taq DNA Polymerase อาจอยู่ในช่วงตั้งแต่ 0.25 µL~1 µL ในการใช้งานเฉพาะด้าน
ปฏิกิริยาโปรแกรม
| ขั้นตอน | อุณหภูมิ-องศาเซลเซียส) | เวลา | รอบ |
| การเสียสภาพเบื้องต้นa | 95 ℃ | 5 นาที | - |
| การเสียสภาพ | 95 ℃ | 15-30 วิ | 30-35 รอบ |
| การหลอมข | 60 ℃ | 15 วิ | |
| ส่วนขยาย | 72 ℃ | 1kb/นาที | |
| ส่วนขยายสุดท้าย | 72 ℃ | 5 นาที | - |
หมายเหตุ:
1) เงื่อนไขการสูญเสียสภาพเริ่มต้นเหมาะสำหรับปฏิกิริยาการขยายสัญญาณส่วนใหญ่ และสามารถแก้ไขได้ตามความซับซ้อนของโครงสร้างเทมเพลตหากโครงสร้างเทมเพลตมีความซับซ้อน สามารถขยายเวลาก่อนการเสียสภาพเป็น 5 – 10 นาทีเพื่อปรับปรุงเอฟเฟกต์การเสียสภาพเริ่มต้น
2) ต้องปรับอุณหภูมิการหลอมตามค่า Tm ของไพรเมอร์ ซึ่งโดยทั่วไปจะตั้งไว้ที่ 3 ~ 5 ℃ ต่ำกว่าค่า Tm ของไพรเมอร์สำหรับเทมเพลตที่ซับซ้อน จำเป็นต้องปรับอุณหภูมิการหลอมและขยายเวลาการขยายเพื่อให้ได้การขยายสัญญาณที่มีประสิทธิภาพ
